独創的な手法を用いたヒトｉＰＳ細胞由来の歯形成細胞群の濃縮法の樹立

2013 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 23593038
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 矯正・小児系歯学
• 研究機関: 鹿児島大学
• 研究代表者: 長谷川 大子 鹿児島大学, 医歯(薬)学総合研究科, 客員研究員 (00295271)
• 研究分担者: 佐藤 正宏 鹿児島大学, 医用ミニブタ先端開発研究センター, 教授 (30287099) ; 齊藤 一誠 新潟大学, 医歯学総合研究科, 准教授 (90404540) ; 山崎 要一 鹿児島大学, 医歯学総合研究科, 教授 (30200645) ; 早崎 治明 新潟大学, 医歯学総合研究科, 教授 (60238095) ; 野口 洋文 独立行政法人国立病院機構, 千葉東病院研究センター, 研究員 (50378733)
• 研究期間 (年度): 2011 – 2013
• キーワード: iPS細胞 / ameloblast / 遺伝子工学

研究概要

pT-ARIP導入iPS細胞をヌードマウスに移植し、生じた奇形腫を初代培養し、歯関連細胞の出現を蛍光発現で検索した結果、蛍光を発現する細胞を観察することができなかった。おそらくin vivoで奇形腫が形成される過程で導入された遺伝子にはサイレンシングなどの遺伝子発現抑制がかかっていた可能性がある。そこで、遺伝子導入前のiPS細胞由来の奇形腫から得た初代培養細胞について、RT-PCR解析を行った。その結果、OCT3/4、NANOG、NESTIN、OC (osteocalcin)、DMP、DSPP、BGPの発現が認められた。また、免疫組織学的解析を行ったところ、AMELXの存在を確認した。

研究成果

• [雑誌論文] Novel cancer vaccination system based on human endo-β-N-Acetyl glucosaminidase gene delivery (2014)
  • 著者名/発表者名: Watanabe S, Haraguchi S, Nakamura S, Sakurai T, Mugikura S, Kajiwara K, Minoiru K, Sato M
  • 雑誌名: Journal of Glycobiology 巻: 3 ページ: 1
  • DOI: 10.4172/2168-958X.1000106
  • 査読あり
• [雑誌論文] The combinational use of CRISPR/Cas9-based gene editing and targeted toxin technology enables efficient biallelic knockout of theα-1,3-galactosyltransferase gene in porcine embryonic fibroblasts (2014)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Miyoshi K, Nagao Y, Nishi Y, Ohtsuka M, Nakamura S, Sakurai T, Watanabe S
  • 雑誌名: Xenotransplantation Article first published online 巻: 21
  • DOI: 10.1111/xen.12089
  • 査読あり
• [雑誌論文] piggyBac-mediated generation of stable transfectants with surface HLA expression from a small number of cells (2013)
  • 著者名/発表者名: Miura H, Inoko H, Inoue I, Okada Y, Tanaka M, Sato M, Ohtsuka M
  • 雑誌名: Analytical Biochemistry 巻: 437 ページ: 29-31
  • DOI: 10.1016/j.ab.2013.02.003
  • 査読あり
• [雑誌論文] Mosaic expression of pluripotency-related proteins oct-3/4 and alkaline phosphatase in human pancreatic carcinoma cell PANC-1 (2013)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Maeda S, Inada E, Saitoh I, Kubota N
  • 雑誌名: Advanced Studies in Biology 巻: 5 ページ: 157-172
  • URL: http://www.doaj.org/doaj?func=issueTOC&isId=150538&uiLanguage=en
  • 査読あり
• [雑誌論文] Hela cells consist of two cell types, as evidenced by cytochemical staining for alkaline phosphatase activity: A possible model for cancer stem cell study (2013)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Kubota N, Inada E, Saitoh I, Ohtsuka M, Nakamura S, Sakurai T, Watanabe S
  • 雑誌名: Advances in Stem Cells Article ID 208514 ページ: 15
  • DOI: 10.5171/2013.208514
  • 査読あり
• [雑誌論文] Targeted toxin-based selectable drug-free enrichment of mammalian cells with high transgene expression (2013)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Akasaka E, Saitoh I, Ohtsuka M, Nakamura S, Sakurai T, Watanabe S
  • 雑誌名: Biology 巻: 2 ページ: 341-355
  • DOI: 10.3390/biology2010341
  • 査読あり
• [雑誌論文] Improvement of hydrodynamics-based gene transfer of nonviral DNA targeted to murine hepatocytes (2013)
  • 著者名/発表者名: Nakamura S, Maehara T, Watanabe S, Ishihara M, Sato M
  • 雑誌名: BioMed Research International Article ID 928790 ページ: 9
  • DOI: 10.1155/2013/928790
  • 査読あり
• [雑誌論文] Improvement of pronuclear injection-based targeted transgenesis (PITT) by iCre mRNA-mediated site-specific recombination (2013)
  • 著者名/発表者名: Ohtsuka M, Miura H, Hayashi H, Nakaoka H, Kimura M, Sato M, Gurumurthy CB, Inoko H
  • 雑誌名: Transgenic Research 巻: 22 ページ: 873-875
  • DOI: 10.1007/s11248-013-9703-x
  • 査読あり
• [雑誌論文] Site-targeted non-viral gene delivery by direct DNA injection into the pancreatic parenchyma and subsequent in vivo electroporation in mice (2013)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Inada E, Saitoh I, Ohtsuka M, Nakamura S, Sakurai T, Watanabe S
  • 雑誌名: Biotechnology Journal 巻: 8 ページ: 1355-1361
  • DOI: 10.1002/biot.201300169
  • 査読あり
• [雑誌論文] STO feeder cells are useful for propagation of primarily cultured human deciduous dental pulp cells in view of elimination of contaminated bacteria and promotion of cellular outgrowth (2013)
  • 著者名/発表者名: Murakami T, Saitoh I, Inada E, Kurosawa M, Iwase Y, Noguchi H, Terao Y, Yamasaki Y, Hayasaki H, Sato M
  • 雑誌名: Cell Medicine 巻: 6 ページ: 75-81
  • DOI: 10.3727/215517913X674234
  • 査読あり
• [雑誌論文] Microbial and enzyme technology : an efficient and convenient method for MiniPrep analysis of recombinant plasmids (2013)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Inada E, Saitoh I, Matsumoto Y
  • 雑誌名: Journal of Biomedical Science and Engineering 巻: 7 ページ: 105-107
  • DOI: 10.4236/jbise.2014.73013
  • 査読あり
• [雑誌論文] Isolation efficiency of mouse pancreatic stem cells is age-dependent (2013)
  • 著者名/発表者名: Takashi K, Noguchi H, Saitoh I, Kataoka H, Watanabe M, Noguchi Y, Fujiwara T
  • 雑誌名: Cell Medicine 巻: 5 ページ: 69-73
  • DOI: 10.3727/215517913X666503
  • 査読あり
• [雑誌論文] Maintenance of viability and function of rat islets with the use of ROCK inhibitor Y27632 (2013)
  • 著者名/発表者名: Kubota Y, Noguchi H, Seita M, Yuasa T, Sasamoto H, Nakaji S, Okitsu T, Fujiwara T, Kobayashi N
  • 雑誌名: Cell Medicine 巻: 6 ページ: 15-23
  • DOI: 10.3727/215517913X674199
  • 査読あり
• [雑誌論文] Development of a technique for efficient gene transfer to antral follicular cells in the mouse ovary (2012)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Akasaka E, Saitoh I, Ohtsuka M, Watanabe S
  • 雑誌名: Systems Biology in Reproductive Medicine 巻: 58 ページ: 136-141
  • DOI: 10.3109/19396368.2012.656796
  • 査読あり
• [雑誌論文] Targeted transgenesis through pronuclear injection of improved vectors into in vitro fertilized eggs (2012)
  • 著者名/発表者名: Ohtsuka M, Miura H, Nakaoka H, Kimura M, Sato M, Inoko H
  • 雑誌名: Transgenic Research 巻: 21 ページ: 225-226
  • DOI: 10.1007/s11248-011-9505-y
  • 査読あり
• [雑誌論文] Expression analysis of aα-1, 3-galactosyltransferase, an enzyme that creates xenotransplantation-relatedα-Gal epitope, in pig preimplantation embryos (2012)
  • 著者名/発表者名: Chi H, Sato M, Yoshida M, Miyoshi K
  • 雑誌名: Animal Science Journal 巻: 83 ページ: 88-93
  • DOI: 10.1111/j.1740-0929.2011.00964.x
  • 査読あり
• [雑誌論文] Successful suppression of endogenousα-1,3-galactosyltransferase expression by RNA interference in pig embryos generated in vitro (2012)
  • 著者名/発表者名: Chi H., Shinohara M., Yokomine T., Sato M., Takao S., Yoshida M., Miyoshi K
  • 雑誌名: Journal of Reproduction and Development 巻: 58 ページ: 69-76
  • DOI: 10.1262/jrd.10-165M
  • 査読あり
• [雑誌論文] In vivo gene transfer in mouse preimplantation embryos after intraoviductal injection of plasmid DNA and. Systems Biology in Reproductive Medicinesubsequent in vivo electroporation (2012)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Akasaka E, Saitoh I, Ohtsuka M, Watanabe S
  • 雑誌名: Posted online on 巻: 58 ページ: 275-287
  • DOI: 10.3109/19396368.2012.688088
  • 査読あり
• [雑誌論文] Determination of the optimal concentration of several selective drugs useful for generating multi-transgenic porcine embryonic fibroblasts (2012)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Ohtsuka M, Miura H, Miyoshi K, Watanabe S
  • 雑誌名: Reproduction in Domestic Animals 巻: 47 ページ: 759-765
  • DOI: 10.1111/j.1439-0531.2011.01964.x
  • 査読あり
• [雑誌論文] A Cre knock-in mouse line on the Sickle tail locus induces recombination in the notochord and intervertebral disks (2012)
  • 著者名/発表者名: Abe K, Araki K, Tanigawa M, Semba K, Ando T, Sato M, Sakai D, Hiyama A, Mochida J, Yamamura K-I
  • 雑誌名: Genesis, Article first published online 巻: 50 ページ: 758-765
  • DOI: 10.1002/dvg.22035
  • 査読あり
• [雑誌論文] CD81 and CD9 work independently as extracellular components upon fusion of sperm and oocyte. (2012)
  • 著者名/発表者名: Ohnami N, Nakamura A, Miyado M, Sato M, Kawano N, Yoshida K, Harada Y, Takezawa Y, Kanai S, Ono C, Takahashi Y, Kimura K, Shida T, Miyado K, Umezawa A
  • 雑誌名: Biology Open Advance Online Publication 巻: 1 ページ: 640-647
  • DOI: 10.1242/bio.20121420
  • 査読あり
• [雑誌論文] A simplified protocol for the semi-large scale recovery of plasmids from Escherichia coli grown on agar plates (2012)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Akasaka E, Saitoh I, Ohtsuka M, Nakamura S, Sakurai T, Watanabe S
  • 雑誌名: Journal of Biomedical Science and Engineering 巻: 5 ページ: 406-408
  • DOI: 10.4236/jbise.2012.57051
  • 査読あり
• [雑誌論文] Generation of a set of mouse STO feeder cell lines that confer resistance to several types of selective drugs (2012)
  • 著者名/発表者名: Saitoh I, Sato M, Iwase Y, Akasaka E, Yamasaki Y, Noguchi H
  • 雑誌名: Cell Medicine 巻: 3 ページ: 97-102
  • DOI: 10.3727/215517912X639414
  • 査読あり
• [雑誌論文] PITT : Pronuclear injection-based targeted transgenesis, a reliable transgene expression method in mice (2012)
  • 著者名/発表者名: Ohtsuka M, Miura H, Sato M, Kimura M, Inoko H, Gurumurthy CB
  • 雑誌名: Experimental animals 巻: 61 ページ: 498-502
  • DOI: 10.1538/expanim.61.489
  • 査読あり
• [雑誌論文] Fluorescent transgenic mice suitable for multi-color aggregation chimera studies (2012)
  • 著者名/発表者名: Ohtsuka M, Miura H, Gurumurthy CB, Kimura M, Inoko H, Yoshimura S, Sato M
  • 雑誌名: Cell and Tissue Research 巻: 350 ページ: 251-260
  • DOI: 10.1007/s00441-012-1470-0
  • 査読あり
• [雑誌論文] Attenuation of limb loss in an experimentally induced hindlimb ischemic model by FGF-2/ F/P MPs as a delivery system (2012)
  • 著者名/発表者名: Nakamura N, Ishihara M, Takikawa M, Kishimoto S, Isoda S, Fujita M, Sato M, Maehara T
  • 雑誌名: Tissue Engineering Part A 巻: 18 ページ: 2239-2247
  • DOI: 10.1089/ten.TEA.2011.0741
  • 査読あり
• [雑誌論文] Liver lobe- and strain-difference in gene expression after hydrodynamics-based gene delivery in mice
  • 著者名/発表者名: Nakamura S, Maehara T, Ishihara M, Sato M
  • 雑誌名: Animal Biotechnology 巻: (in press)
  • 査読あり
• [学会発表] Multipotency of juvenile human buccal epithelial cells (2014)
  • 著者名/発表者名: Murakami T, Saitoh I, Iwase Y, Inada E, Mastuyama J, Ohshima H, Hayasaki H, Sato M
  • 学会等名: AADR
  • 発表場所: North Carolina
  • 年月日: 20140300
• [学会発表] gcr2タンパクは糖鎖を介してI型BMP受容体と結合しシグナル伝達制御に関与する (2013)
  • 著者名/発表者名: 渡部聡、梶原景正、麥倉真一郎、桜井敬之、中村伸吾、木村穣、佐藤正宏
  • 学会等名: 第36回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 20131200
• [学会発表] RISPR/Cas9による遺伝子編集と標的毒素法との組み合わせは、α-1,3-galactosyltransferase遺伝子を完全にKOしたブタ胎仔性線維芽細胞の効率的作製に有効である (2013)
  • 著者名/発表者名: 佐藤正宏、三好和睦、長尾洋三、西洋平、大塚正人、中村伸吾、桜井敬之、渡部聡
  • 学会等名: 第36回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 20131200
• [学会発表] ハイドロダイナミクスに基づく生体内遺伝子導入における外来遺伝子発現のマウス系統差および肝臓ローブ間の差 (2013)
  • 著者名/発表者名: 中村伸吾、前原正明、渡部聡、石原雅之、佐藤正宏
  • 学会等名: 第36回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 20131200
• [学会発表] マウス成熟卵胞細胞への生体内遺伝子導入法の開発 (2013)
  • 著者名/発表者名: 佐藤正宏、赤坂恵理、齋藤一誠、大塚正人、渡部聡
  • 学会等名: 第35回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 福岡
  • 年月日: 20131200
• [学会発表] Syngenic grafting of a whole male juvenile gonadal tissue into the adult testes confers successful spermatogenesis in mice (2013)
  • 著者名/発表者名: Tada N, Kanai F, Nakamura E, Lu H, Saito M, Sato M
  • 学会等名: The 3rd World Congress of the International Society for Fertility Preservation
  • 発表場所: Malia Valencia Hotel, Valencia, Spain
  • 年月日: 20131107-09
• [学会発表] トランスポゾンPiggyBacシステムによる複数遺伝子のブタ細胞への同時導入 (2013)
  • 著者名/発表者名: 郡山美優,稲田絵美,齋藤一誠,三浦浩美,大塚正人,中村伸吾,桜井敬之,渡部聡,三好和睦,佐藤正宏
  • 学会等名: 第106回日本繁殖生物学会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 20130900
• [学会発表] ヒト乳歯歯髄由来iPS細胞樹立におけるフィーダー細胞選択の重要性 (2013)
  • 著者名/発表者名: 村上智哉,齊藤一誠,稲田絵美,岩瀬陽子,長谷川大子,窪田直子,松本祐子,大島邦子,岡暁子,山崎要一,早崎治明
  • 学会等名: 第51回日本小児歯科学会
  • 発表場所: 岐阜
  • 年月日: 20130500
• [学会発表] 受精卵へのiCre mRNA注入によるターゲットトランスジェネシス法(PITT法)の効率改善 (2013)
  • 著者名/発表者名: 大塚正人、三浦浩美、佐藤正宏、木村穣
  • 学会等名: 第60回日本実験動物学会総会
  • 発表場所: 茨木
  • 年月日: 20130500
• [学会発表] Attempts to produce transgenic mice by a novel in vivo method, as an alternative to the pre-existing pronuclear microinjection- based transgenesis (2013)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Akasaka E, Ssaito I, Ohtsuka M, Watanabe S
  • 学会等名: 11th Transgenic Technology Meeting
  • 発表場所: Guangzhou City, P.R. China
  • 年月日: 20130225-27
• [学会発表] 初代ヒト乳歯歯髄細胞における幹細胞特異的遺伝子発現の探索 (2012)
  • 著者名/発表者名: 乃村俊樹,齊藤一誠,稲田絵美,長谷川大子,松本祐子,窪田直子,山﨑要一
  • 学会等名: 第30回日本小児歯科学会九州地方会大会
  • 発表場所: 長崎
  • 年月日: 20121100