新規タンパク質発現抑制法ドメイン干渉によるヒトPDI及びsEHの機能解析

2012 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 23655162
• 研究種目: 挑戦的萌芽研究
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 生体関連化学
• 研究機関: 関西学院大学
• 研究代表者: 今岡 進 関西学院大学, 理工学部, 教授 (60145795)
• 連携研究者: 藤原 伸介 関西学院大学, 理工学部, 教授 (90263219)
• 研究期間 (年度): 2011 – 2012
• キーワード: ドメイン干渉 / タンパク質発現制御法 / プロテインジスルヒドイソメラーゼ / 可溶性エポキシドヒドロラーゼ / ほ乳細胞

研究概要

ドメイン干渉は大腸菌で見いだされた現象で、あるドメインを過剰発現すると発現中の内在性のタンパク質と相互作用することで不安定化しそのタンパク質の発現を抑制できる技術である。この現象を哺乳動物細胞に適用して新たなタンパク質発現方法に発展させる試みが本研究である。まず、この技術を適応するタンパク質としてPDIを選び、そのドメインの相互作用について明らかにした。PDIはa,b,b',a',cのドメインからなるが、b'とa'ドメインが相互作用していることが明らかとなった。そこでHEK393細胞にb'ドメインを発現させたところ内在性のPDIの発現が低下した。哺乳動物におけるドメイン干渉応用への可能性が開けた。

研究成果

• [雑誌論文] Protein disulfide isomerase regulates the thyroid hormone receptor-mediated gene expression via redox factor-1 through thiol reduction-oxidation. (2013)
  • 著者名/発表者名: Hashimoto S and Imaoka S.
  • 雑誌名: J. Biol. Chem. 巻: 288 ページ: 1706-1716
  • DOI: doi:10.1074/jbc.M112.365239
  • 査読あり
• [雑誌論文] Crystallization and preliminary crystallographic analysis of the complex between triiodothyronine and the bb' fragment of rat protein disulfide isomerase. (2012)
  • 著者名/発表者名: Hashimoto S, Ito L, Okumura M, Shibano T, Nawata M, Kumasaka T, Yamaguchi H, and Imaoka S.
  • 雑誌名: Acta Crystallogr Sect F Struct Biol Cryst Commun. 巻: 68(Pt4) ページ: 476-478
  • DOI: doi:10.1107/S1744309112007439
  • 査読あり
• [雑誌論文] TSN-terminal domain of soluble epoxide hydrolase negatively regulates the VEGF-mediated activation of endothelial nitric oxide synthase. (2012)
  • 著者名/発表者名: Hou H.H, Hammock B.D, Su K.H, Morisseau C, Kou Y.R, Imaoka S, Oguro A, Shyue S.K, Zhao J.F. Lee.
  • 雑誌名: Cardiovasc Res. 巻: 93(1) ページ: 120-129
  • DOI: doi:10.1074/jbc.M112.365239
  • 査読あり
• [雑誌論文] Effects of polybrominated diphenyl ethers (PBDEs) and their derivatives on protein disulfide isomerase activity and growth hormone release of GH3 cells. (2012)
  • 著者名/発表者名: Hashimoto S, Yoshimura H, Okada K, Uramura N, Sugihara K, Kitamura S,and Imaoka S.
  • 雑誌名: Chem. Res. Toxicol. 巻: 19 ページ: 656-663
  • DOI: doi:10.1021/tx200374s
  • 査読あり
• [雑誌論文] Lysophosphatidic acids are new substrates for the phosphatase domain of soluble epoxide hydrolase. (2012)
  • 著者名/発表者名: Oguro A and Imaoka S.
  • 雑誌名: J. Lipid. Res. 巻: 53 ページ: 505-512
  • DOI: doi:10.1194/jlr.M022319
  • 査読あり
• [雑誌論文] Chemical stress on protein disulfide isomerases and inhibition of their functions. (2011)
  • 著者名/発表者名: Imaoka S
  • 雑誌名: Int. Rev. Cell Mol. Biol. 巻: 290 ページ: 121-166
  • DOI: doi:10.1016/B978-0-12-386037-8
  • 査読あり
• [学会発表] 可溶性エポキシドヒドロラーゼの脱リン酸化ドメインの新規基質、リゾホスファチジン酸について (2012)
  • 著者名/発表者名: 大黒亜美、今岡進
  • 学会等名: 第85回日本生化学会大会
  • 発表場所: 福岡国際会議場
  • 年月日: 2012-12-15
• [学会発表] 酸化ストレスにおける可溶性エポキシド加水分解酵素発現抑制機構の解明 (2012)
  • 著者名/発表者名: 種田祥子、大黒亜美、今岡進
  • 学会等名: 第85回日本生化学会大会
  • 発表場所: 福岡国際会議場
  • 年月日: 2012-12-15
• [学会発表] Identification and Comparison of EPHX2(sEH) and EPHX4(EH4) in Xenopus laevis (2012)
  • 著者名/発表者名: Endang R. Purba, Oguro A, Imaoka S.
  • 学会等名: 第85回日本生化学会大会
  • 発表場所: 福岡国際会議場
  • 年月日: 2012-12-15
• [学会発表] Evaluation of Catalytic activities of soluble epoxide hydrolase(sEH) toward endogenous substrates, EETs and LPAs,in six genetic variants of polymorphism (2012)
  • 著者名/発表者名: Elsa, A. Leuhery, Endang, R. Purba, Oguro A, Imaoka S.
  • 学会等名: 第85回日本生化学会大会
  • 発表場所: 福岡国際会議場
  • 年月日: 2012-12-15
• [学会発表] 低酸素応答から酸化ストレス応 答まで因子のクロストークについて (2012)
  • 著者名/発表者名: 今岡進
  • 学会等名: 第85回日本生化学会大会
  • 発表場所: 福岡国際会議場
  • 年月日: 2012-12-14
• [学会発表] プロテインジスルヒドイソメラーゼ(PDI)への環境化学物質の結合とその作用機序について (2012)
  • 著者名/発表者名: 今岡進
  • 学会等名: 第39回日本毒性学会学術年会
  • 発表場所: 仙台国際センター
  • 年月日: 2012-07-19
• [学会発表] Transmembrane thioredoxin-likeprotein(TMX)のビスフェノールA結合性とイソメラーゼ活性の検討 (2011)
  • 著者名/発表者名: 志波徹朗、橋本翔子、今岡進
  • 学会等名: 第84回日本生化学会大会
  • 発表場所: 京都国際会館
  • 年月日: 20110923-20110924
• [学会発表] 可溶性エポキシドヒドロラーゼ(sEH)の酸化ストレス下におけるSp1を介した発現調節 (2011)
  • 著者名/発表者名: 大黒亜美、川ノ上梨花、今岡進
  • 学会等名: 第84回日本生化学会大会
  • 発表場所: 京都国際会館
  • 年月日: 2011-09-22
• [学会発表] Structural changes of protein disulfide isomerase by the binding of bisphenol A (2011)
  • 著者名/発表者名: Hashimoto S, Shiomoto K, Okada K, and Imaoka S.
  • 学会等名: ESF-EMBO Symposum: Glutathione and Related Thiols in Living Cells.
  • 発表場所: Santa Feliu de Guixols,Spain
  • 年月日: 2011-09-06
• [学会発表] Proliferation of cancer cells is mediated by EET production (2011)
  • 著者名/発表者名: Oguro A, Sakamoto K, and Imaoka S.
  • 学会等名: 52nd International Conference on the Bioscience of Lipids.
  • 発表場所: Warsaw,Poland
  • 年月日: 2011-08-30
• [学会発表] Contribution of epoxyeicosatrienoic acids (EETs) to hypoxic response of cells (2011)
  • 著者名/発表者名: Imaoka S, Oguro A, and Suzuki S.
  • 学会等名: 52nd International Conference on the Bioscince of Lipids.
  • 発表場所: Warsaw,Poland
  • 年月日: 2011-08-30
• [備考] 関西学院大学理工学部今岡研究室
  • URL: http://sci-tech.ksc.kwansei.ac.jp/imaoka/
• [産業財産権] ビスフェノールA吸着剤及びその利用 (2013)
  • 発明者名: 藤原伸介・今岡進
  • 権利者名: 学校法人関西学院
  • 産業財産権番号: 特許,特願 2013-042324
  • 出願年月日: 2013-03-04