酵素標識後に蛍光を発するスプリット蛍光タグの開発

2012 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 23656518
• 研究種目: 挑戦的萌芽研究
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 生物機能・バイオプロセス
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 山口 哲志 東京大学, 先端科学技術研究センター, 講師 (80398106)
• 研究期間 (年度): 2011 – 2012
• キーワード: 蛍光標識 / 酵素 / 動物細胞 / タンパク質 / ペプチド / スプリットタグ / 細胞内導入 / ターンオンプローブ

研究概要

酵素を用いてタンパク質へ特異的に標識可能であり、また、標識して初めて蛍光を発するようなタグ配列-蛍光ラベル化剤のペアの開発を行った。その結果、ソルターゼによる特異的な連結反応後に2.6倍に蛍光が増大するペアを創製できた。そこで、細胞内での標識を可能にするため、細胞外で発現精製した連鎖球菌由来ソルターゼAを細胞内に導入して連結反応を行う方法を開発した。

研究成果

• [雑誌論文] Intracellular protein cyclization catalyzed by exogenously transduced Streptococcus pyogenes sortase A
  • 著者名/発表者名: J. Zhang, S. Yamaguchi, H. Hirakawa and T. Nagamune
  • 雑誌名: J. Biosci. Bioeng. 巻: (in press)
  • DOI: DOI:10.1016/j.jbiosc.2013.03.006.
  • 査読あり
• [学会発表] Intracellular protein cyclization catalyzed by streptococcus pyogenes sortase A through protein transduction (2012)
  • 著者名/発表者名: J. Zhang, S. Yamaguchi, H. Hirakawa, T.Nagamune
  • 学会等名: The 18^th Young Asian Biochemical Engineers' Community (YABEC2012)
  • 発表場所: 徳島, 徳島大学
  • 年月日: 20121000
• [学会発表] Enzymatic protein labeling using turn-on split fluorescent tag (2012)
  • 著者名/発表者名: J. Zhang, S. Yamaguchi, S. Inoue, H.Hirakawa, T. Nagamune
  • 学会等名: 15^th International Biotechnology Symposiumand Exhibition (IBS2012)
  • 発表場所: Daegu, Korea
  • 年月日: 20120900
• [学会発表] 光応答性分子修飾による蛋白質の細胞内局在制御 (2012)
  • 著者名/発表者名: 前田泰一,山口哲志,長棟輝行
  • 学会等名: 第6回バイオ関連化学シンポジウム
  • 発表場所: 札幌,北海道大学
  • 年月日: 20120900
• [学会発表] 酵素反応でturn-onするスプリット蛍光タグの開発 (2012)
  • 著者名/発表者名: 山口哲志,井上紫織,平川秀彦,長棟輝行
  • 学会等名: 第6回バイオ関連化学シンポジウム
  • 発表場所: 札幌,北海道大学
  • 年月日: 20120900
• [学会発表] Photo-assisted protein transduction into cytoplasm by modifying or mixing with fluorophore-conjugated poly-arginine peptides (2011)
  • 著者名/発表者名: Y. Maeda, S. Yamaguchi, W. Ishihara, H.Hirakawa, T. Nagamune
  • 学会等名: The 17^th Young Asian Biochemical Engineers' Community (YABEC2011)
  • 発表場所: Incheon, Korea
  • 年月日: 20111000