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2012 年度 実績報告書

一分子蛍光観察用ライトガイド型フローセルの開発

研究課題

研究課題/領域番号 23657097
研究機関東北大学

研究代表者

高橋 聡  東北大学, 多元物質科学研究所, 教授 (30283641)

キーワード一分子観察 / 蛍光 / ライトガイド / フローセル / 微細加工
研究概要

一分子レベルでタンパク質を簡単に観察する手法の開発が求められている。本研究では、ライトガイド型フローセルを開発し、光学基板に固定せずに、タンパク質一分子が発する蛍光を継続的に観測することを目的として計画した。昨年度の研究において、一分子観察のための共焦点顕微鏡の開発などを行った。しかし、その後の検討から当初計画したライトガイド型のフローセルの製作が実用上困難であることが判明した。そのため、本年度は方針を変更し、微細加工技術による石英製のフローセルの加工を集中して行い、本研究の目的であった基板に固定化しない一分子観察装置のための新規デバイス製作を行った。具体的には、一分子観察を大きく進展させるさや流型フローセルと、溶液混合型フローセルの製作を行った。第一に製作したのは、一分子観察の際に試料分子を溶液中の特定の位置に制約するためのさや流セルである。このために、石英板を微細加工し、ダム構造と呼ばれる構造体を作り込むことで、試料流と運搬流を制御することに成功した。このセルを用いることで、試料流をフローセルの中心部にのみ流すことを可能にした。第二に製作したのは、溶液を混合しながら一分子観察を行うための混合型フローセルである。このセルを成功させるには、一分子観察のための浅い流路に、溶液混合が可能な十分な流速をながせるように、入念な設計が必要となる。そのため、流体力学的な考察を行い、適度な流速により溶液混合を可能にするセルの設計を行った。このセルをさらに製作することで、溶液混合後の試料の一分子観察が可能になると予想される。

  • 研究成果

    (22件)

すべて 2013 2012

すべて 雑誌論文 (3件) (うち査読あり 3件) 学会発表 (19件) (うち招待講演 5件)

  • [雑誌論文] Hydration-State Change of horse Heart Cytochrome c Corresponding to Trifluoroacetic-Acid-Induced unfolding2013

    • 著者名/発表者名
      Miyashita, Y., Wazawa, T., Mogami, G., Takahashi, S., Sambongi, Y., Suzuki, M
    • 雑誌名

      Biophysical Journal

      巻: 104 ページ: 163-172

    • 査読あり
  • [雑誌論文] A New Way to Degrade Heme -THE MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS ENZYME MhuD CATALYZES HEME DEGRADATION WITHOUT GENERATING CO*-2013

    • 著者名/発表者名
      Shusuke Nambu, Toshitaka Matsui, Celia W. Goulding, Satoshi Takahashi, and Masao Ikeda-Saito
    • 雑誌名

      J Biol Chem.

      巻: 288 ページ: 10101-10109

    • DOI

      10.1074/jbc.M112.448399.

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Long-Term Observation of Fluorescence of Free SingleMolecules To Explore Protein-Folding Energy Landscapes2012

    • 著者名/発表者名
      Kamagata K, Kawaguchi T, Iwahashi Y, Baba A, Fujimoto K, Komatsuzaki T, Sambongi Y, Goto Y, Takahashi S
    • 雑誌名

      J. Am. Chem. Soc.

      巻: 134 ページ: 11525-11532

    • DOI

      10.1021/ja3020555.

    • 査読あり
  • [学会発表] 高速一分子蛍光追跡による柔らかなタンパク質の運動追跡2013

    • 著者名/発表者名
      高橋聡
    • 学会等名
      日本化学会第93回春季年会
    • 発表場所
      草津
    • 年月日
      20130320-20130325
    • 招待講演
  • [学会発表] Microsecond-Resolved tracking of the Unfolded State of BdpA by a Line Confocal Detection of Single Molecule Fluorescence2013

    • 著者名/発表者名
      Satoshi Takahashi
    • 学会等名
      International Symposium on Protein Folding and Its Biological Significance
    • 発表場所
      岡崎
    • 年月日
      20130304-20130306
    • 招待講演
  • [学会発表] GroEL結合ペプチドの一分子蛍光拡散測定2012

    • 著者名/発表者名
      渡邉優, 安藤嗣音, 鎌形清人, 野島達也, 田口英樹, 芳坂貴弘, 高橋聡
    • 学会等名
      日本生物物理学会東北支部会2012
    • 発表場所
      仙台
    • 年月日
      20121221-20121221
  • [学会発表] マイクロ秒分解一分子FRET測定によるタンパク質折り畳み運動の追跡2012

    • 著者名/発表者名
      小井川浩之
    • 学会等名
      日本生物物理学会東北支部会2012
    • 発表場所
      仙台
    • 年月日
      20121221-20121221
  • [学会発表] 人工タンパク質のデザインを目指した蛍光一分子ソーターの開発2012

    • 著者名/発表者名
      斉藤翔, 小井川浩之, 鎌形清人, 高橋聡
    • 学会等名
      日本生物物理学会東北支部会2012
    • 発表場所
      仙台
    • 年月日
      20121221-20121221
  • [学会発表] Single-molecule fluorescence and diffusion measurements of a GroEL-binding peptide2012

    • 著者名/発表者名
      Suguru Watanabe, Shion Ando, Kiyoto Kamagata, Tatsuya Nojima, Hideki Taguchi, Takahiro Hohsaka, Satoshi Takahashi
    • 学会等名
      第85回日本生物化学会大会
    • 発表場所
      福岡
    • 年月日
      20121214-20121216
  • [学会発表] Construction of a microfluidic system for fluorescence based single-molecule sorting2012

    • 著者名/発表者名
      Saitoh, HIroyuki Oikawa, Kiyoto Kamagata, Satsohi Takahashi
    • 学会等名
      第12回東北大学多元物質科学研究所研究発表会
    • 発表場所
      仙台
    • 年月日
      20121210-20121210
  • [学会発表] Microsecond-resolved tracking of the unfolded state of BdpA by a line confocal detection of single molecule fluorescence2012

    • 著者名/発表者名
      Hiroyuki Oikawa,Yuta Suzuki, Masataka Saito, Kiyoto Kamagata, Munehito Arai, Satoshi Takahashi
    • 学会等名
      新学術領域研究「揺らぎと生体機能」第6回公開シンポジウム
    • 発表場所
      京都
    • 年月日
      20121205-20121206
  • [学会発表] Microsecond-resolved tracking of the unfolded state of BdpA by a line confocal detection of single molecule fluorescence2012

    • 著者名/発表者名
      Hiroyuki Oikawa, Yuta Suzuki, Masataka Saito, Kiyoto Kamagata, Munehito Arai, Satoshi Takahashi
    • 学会等名
      Indo- Japan Workshop on 'Recent Advances in Spectroscopy and Microscopy: Fundamentals and Applications to Materials and Biology
    • 発表場所
      India,Hyderabad
    • 年月日
      20121120-20121121
    • 招待講演
  • [学会発表] 高速一分子FRET追跡によるタンパク質のフォールディングダイナミクス2012

    • 著者名/発表者名
      高橋聡
    • 学会等名
      最近の光源開発・計測法の進歩と分光学への応用
    • 発表場所
      京都
    • 年月日
      20121102-20121102
    • 招待講演
  • [学会発表] Microsecond-Resolved Tracking of The Unfolded State of BdpA by a Line Confocal Detection of Single Molecule Fluorescence2012

    • 著者名/発表者名
      Satoshi Takahashi
    • 学会等名
      International Symposium on Protein Folding and Dynamics
    • 発表場所
      India,Bangalore
    • 年月日
      20121015-20121017
    • 招待講演
  • [学会発表] Construction of a microfluidic system for fluorescence-based single-molecule sorting2012

    • 著者名/発表者名
      Sho Saitoh, Hiroyuki Oikawa, Kiyoto Kamagata, Satoshi Takahashi
    • 学会等名
      第50回日本生物物理学会年会
    • 発表場所
      名古屋
    • 年月日
      20120922-20120924
  • [学会発表] Microsecond-resolved traces of protein folding by single-molecule FRET measurements2012

    • 著者名/発表者名
      Hiroyuki Oikawa, Yuta Suzuki, Kiyoto Kamagata, Munehito Arai, Satoshi Takahashi
    • 学会等名
      第50回日本生物物理学会年会
    • 発表場所
      名古屋
    • 年月日
      20120922-20120924
  • [学会発表] Single-molecule structural analysis of tumor suppressor p53 using scanning probe microscopes2012

    • 著者名/発表者名
      Seiya Takahashi, Yasuyuki Sainoo, Risa kashima, Takashi Tokino, Tadahiro Komeda, Satoshi Takahashi, Kiyoto Kamagata
    • 学会等名
      第50回日本生物物理学会年会
    • 発表場所
      名古屋
    • 年月日
      20120922-20120924
  • [学会発表] マイクロ秒分解一分子蛍光検出による変性状態タンパク質の高速構造揺らぎ2012

    • 著者名/発表者名
      小井川浩之, 鎌形清人, 新井宗仁, 高橋聡
    • 学会等名
      新学術領域「揺らぎと生体機能」「水和とATP」合同公開シンポジウム「ゆらぎと水 - 生命のエネルギーと機能の分子機構を探る」
    • 発表場所
      大阪
    • 年月日
      20120914-20120915
  • [学会発表] 新規一分子FRET計測技術によるABCトランスポーターのATP加水分解機構の解析2012

    • 著者名/発表者名
      中野駿介, 七谷圭 , 魚住信之, 高橋聡, 鎌形清人
    • 学会等名
      新学術領域「揺らぎと生体機能」「水和とATP」合同公開シンポジウム「ゆらぎと水 - 生命のエネルギーと機能の分子機構を探る」
    • 発表場所
      大阪
    • 年月日
      20120914-20120915
  • [学会発表] 一分子蛍光観察によるタンパク質のエネルギー地形解析2012

    • 著者名/発表者名
      高橋聡,小井川浩之,鎌形清人
    • 学会等名
      第12回日本蛋白質科学会年会
    • 発表場所
      名古屋
    • 年月日
      20120620-20120622
  • [学会発表] マイクロ秒分解一分子FRET測定による蛋白質構造変化の追跡2012

    • 著者名/発表者名
      小井川浩之, 鎌形清人, 飯島一生, 芳坂貴弘, 高橋聡
    • 学会等名
      第12回日本蛋白質科学会年
    • 発表場所
      名古屋
    • 年月日
      20120620-20120622
  • [学会発表] 新規一分子蛍光観測法による蛋白質の折り畳みの自由エネルギー地形の探索2012

    • 著者名/発表者名
      鎌形清人, 川口敏史, 馬場昭典, 三本木至宏, 小松崎民樹, 高橋聡
    • 学会等名
      第12回日本蛋白質科学会年
    • 発表場所
      名古屋
    • 年月日
      20120620-20120622

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公開日: 2014-07-24  

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