膜結合型特異抗体を用いた生体膜上での分子間相互作用の解析ツールの開発

2012 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 23657142
• 研究種目: 挑戦的萌芽研究
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 発生生物学
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 平良 眞規 東京大学, 大学院・理学系研究科, 准教授 (60150083)
• 研究期間 (年度): 2011 – 2012
• キーワード: 膜結合型抗体 / 一本鎖抗体 / 細胞間架橋 / 力学的相互作用

研究概要

抗HAと抗Mycモノクローナル抗体のcDNAをクローニングし、それを基に膜結合型抗体のコンストラクトを作成し細胞に発現させたところ、実際に膜結合型抗体として機能することを確認した。これを用いて細胞外における分泌蛋白質の拡散性を調べることが可能となった。このコンストラクトを基に一本鎖抗体を作成し、抗体として機能することを示した。次に、膜結合型抗体を利用して、FRET効率が変化する張力センサーモジュール(TSMod)を向かい合う細胞間で橋渡しをすることで細胞間に働く張力の測定を試みた。また膜結合型抗体と膜結合型抗原で細胞間を架橋することで、原腸胚期の発生に影響が現れることを見出した。この架橋方法は、形態形成における細胞間の可塑性を解析するツールとなると考えられる。

研究成果

• [雑誌論文] Dynamic in vivo binding of transcription factors to cis-regulatory modules of cer and gsc in the stepwise formation of the Spemann-Mangold organizer. (2012)
  • 著者名/発表者名: Sudou, N., Yamamoto, S., Ogino, H. and Taira, M.
  • 雑誌名: Development 巻: 139 ページ: 1651-1661
• [雑誌論文] The medaka enhancer mutant for zic1/zic4 provides molecular insights into teleost caudal fin evolution. (2012)
  • 著者名/発表者名: Moriyama, Y., Kawanishi, T., Nakamura, R., Tsukahara, T., Sumiyama, K., Suster, M., Kawakami, K., Toyoda, A., Fujiyama, A., Yasuoka, Y., Nagao, Y., Sawatari, E., Shimikzu, A., Wakamatsu, Y., Hibi, M., Taira, M., Okabe, M., Naruse, K., Hashimoto, H., Shimada, A., Takeda, H.
  • 雑誌名: Curr. Biol. 巻: 22 ページ: 601-607
• [学会発表] Heparan sulfate nanostructures regulate extracellular Wnt distribution and act asa core for Wnt/Dishevelled signalosome formation (2012)
  • 著者名/発表者名: Masanori Taira and Yusuke Mii
  • 学会等名: 14th International Xenopus Conference
  • 発表場所: Giens Peninsula (France)
  • 年月日: 20120909-13
• [学会発表] Frzbregulates extracellular distribution of Wnt8 via interactions with heparan sulfate (2011)
  • 著者名/発表者名: Yusuke Mii, Kenichi Nakazato, AtsushiMochizuki and Masanori Taira
  • 学会等名: Wnt 2011 Meeting, UCLA
  • 発表場所: California, U.S.A.
  • 年月日: 20110629-0703
• [学会発表] Secreted Frizzled-related proteins (sFRPs) regulate extracellular distribution of Wnt ligands via interactions with heparan sulfate.(分泌性 Frizzled 関連蛋白質 (sFRPs) はヘパラン硫酸を介して細胞外の Wnt リガンドの分布を制御する。) (2011)
  • 著者名/発表者名: Yusuke Mii, Kenichi Nakazato, Atsushi Mochizuki and Masanori Taira
  • 学会等名: 日本発生生物学会第44回大会
  • 発表場所: 沖縄コンベンションセンター
  • 年月日: 20110519-21
• [備考]
  • URL: http://www.biol.s.u-tokyo.ac.jp/users/lmb/index.php-Home