研究課題
DNAメチル化の影響を調べる予備実験とした、ヒト培養細胞へと食品由来の非変異原性発がん物質を添加する際の負荷量決定した。イソチオシアネ-ト、ヒドロキノンおよびピロリジンアルカロイドを、申請者の所属する研究室で保持している腸管表皮細胞由来のCaCo2細胞および肝臓由来のHepG2細胞へと添加し、様々な非変異原性発がん物質存在下における細胞増殖曲線を書くことにより、細胞増殖に影響を与えない各化合物の最大負荷量を決定できた。
2: おおむね順調に進展している
DNAメチル化の影響を調べる予備実験し、イソチオシアネ-ト、ヒドロキノンおよびピロリジンアルカロイドを、申請者の所属する研究室で保持している腸管表皮細胞由来のCaCo2細胞および肝臓由来のHepG2細胞へと添加し、様々な非変異原性発がん物質存在下における細胞増殖曲線を書くことにより、細胞増殖に影響を与えない各化合物の最大負荷量を決定できた。本結果は、次度以降のエピジェネティック解析の基礎となる結果であると考えられる。
本研究で明らかになった条件下で、イソチオシアネ-ト、ヒドロキノンおよびピロリジンアルカロイドを各々添加したCaCo2細胞およびHepG2細胞から、定法に従いゲノムDNAを回収する。ヒトがん関連薬物代謝・薬物活性化酵素P450のメチル化領域をスクリーニングする目的で、メチル化感受性制限酵素によるDNA消化実験を行う。次に、15種の主要ヒト薬物代謝型P450（CYP１A1、CYP1A2、CYP2A6、CYP2A13、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C18、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、CYP2F1、CYP3A4、CYP3A5およびCYP3A7）について、各々のプロモーター領域2kbpとP450遺伝子を含むゲノム領域を増幅可能なPCRプライマーを作製する予定である。
消耗品代として、遺伝子組み換え用試薬、一般試薬類を購入する予定である。また、国内学会発表経費として、学会参加費と旅費を計上する。
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