研究課題
マスト細胞(MC)は、アレルギーや自己免疫の中心的な役割を果たすが、近年、紫外線(UV)照射による免疫抑制にも必須の役割を果たすことが示された。UV照射による免疫抑制は、MC欠損マウスでは見られず、MC再構成により回復する。さらに、UV照射はMCのリンパ節移行を引き起こし、この移行を阻害すると免疫抑制が消失する。これは、UV照射により移行したMCが、リンパ節で全身性の免疫抑制を引き起こすことを示唆する。しかし、リンパ節へ移行したMCがどのような分子機構で免疫抑制を引き起こすのかについては全く不明である。本研究では、申請者のもつ超微量RNA増幅技術とMC可視化マウスを組み合わせることで、リンパ節へ移行したMCを同定し、発現プロファイル解析によりMC機能の変化を明らかにする。本研究の目的は、リンパ節へ移行したMCがいかなる遺伝子発現プロファイル変動を示すのかを捉えることで、MCによる免疫抑制に働く分子を探索・同定することである。 今年度は、連携研究者の椛島ら（京大・医）とともに、１）本研究計画の基盤となる結果の再現性検証と２）Ｔ細胞を例として皮膚からリンパ節へ移行した細胞のアレイ解析を予定していた。しかしながら、１）再現性検証については「UV照射による免疫抑制は、MC欠損マウスでは見られず、MC再構成により回復する」ような実験条件の探索は困難であり、「免疫抑制がMC欠損マウスで消失する」ことが再現できなかった。一方、２）に関しては、基礎検討を順調に行うことができた。
3: やや遅れている
本研究計画の基盤となる結果「免疫抑制がMC欠損マウスで消失する」ことが再現できなかったため。
当初目的としていたマスト細胞による免疫抑制機能を調べる実験系は再現できなかったが、炎症等の刺激に応じて局所からリンパ節へ移行したマスト細胞がどのような免疫制御を行うのかは不明であるため、これを明らかとする。具体的には、炎症刺激依存的にリンパ節に移行したマスト細胞と、スタティックな条件でリンパ節内にいるマスト細胞の遺伝子発現プロファイルを調べ、骨髄培養マスト細胞と比較する。
１）Yagiらの論文で報告された、IL-4遺伝子内に存在するMCに特異的な発現を担うエンハンサー(IE)を付加したGFPレポーターTg（MC特異的GFP発現）マウスを用いて、炎症や UV照射によってMCのリンパ節への移行の経時変化を調べる。皮膚やリンパ節でのMCのGFP発現がMC単離に十分強いものかどうかの確認も行う。２）MC特異的GFP発現Tgマウスを用いたMC発現プロファイル解析GFP-MCをMC欠損マウスの皮膚局所あるいは全身性に再構成した後、皮膚にDNFBを塗布し、6時間後にリンパ節を摘出し、GFP陽性細胞を単離する。DNFBの有無でGeneChip解析を行い、リンパ節の MCの発現プロファイルを比較する。
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Biol. Pharm. Bull.
巻: 35 ページ: 408-412
10.1248/bpb.35.408
J. Lipid Res.
巻: 52 ページ: 1500-1508
10.1194/jlr.M013615
