| 研究課題/領域番号 |
23659057
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| 研究機関 | 熊本大学 |
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研究代表者 |
森岡 弘志 熊本大学, 生命科学研究部, 教授 (20230097)
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| 研究分担者 |
諏訪 喜昭 熊本大学, 薬学部, 特任助教 (50516127)
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| 研究期間 (年度) |
2011-04-28 – 2013-03-31
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| キーワード | AGE認識抗体 / 分子進化工学 / ファージディスプレイ / scFv抗体 / 低分子抗原 / デンドリマー型ペプチド |
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| 研究概要 |
タンパク質の糖化反応生成物であるAGE（Advanced Glycation Endproducts）は，多種多様な構造を持つ低分子量の翻訳後修飾体である．糖尿病関連疾患の研究を進める上で，抗AGEモノクローナル抗体は有用であるが，エピトープであるAGEが低分子化合物であり，様々なタンパク質分子上に生成するため，従来の方法で，特異性，ならびに，結合性が高い抗AGEモノクローナル抗体を作製するのは困難である．本研究では，化学的にAGE修飾した合成ペプチド（デンドリマー型ペプチド）と分子進化工学の手法を用いて，各種AGEに対して，特異性，ならびに，結合性が高い遺伝子組換え型抗体（一本鎖抗体；scFv）の開発研究を行う．(1) AGEで修飾されたデンドリマー型ペプチドの作製 ー（-Gly-Ala-Gly-(Lys/Arg)-Gly-Ala-Gly-）をコア配列とするデンドリマー型ペプチドを合成し，反応性の高いα,β-ジカルボニル化合物を反応させ，多種多様のAGE修飾体を得た．(2) AGEで修飾されたペプチド，および，タンパク質のマウスへの免疫 ー AGE修飾されたデンドリマー型ペプチドをマウスに免疫し，血清中の抗体価が上がったマウスより脾臓を摘出した．(3) 抗体可変領域（Fv）遺伝子ライブラリーの作製，および，ファージディスプレイ法による組換え抗体分子のスクリーニング ー マウス脾臓より，RT-PCR法によって，IgG抗体の重鎖および軽鎖Fv遺伝子ライブラリーを作製し，ファージディスプレイ法によるスクリーニングにより， AGEを識別する組換え型モノクローナル抗体（一本鎖抗体；scFv）の獲得を進めている．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
AGEで修飾されたデンドリマー型ペプチド〔（-Gly-Ala-Gly-(Lys/Arg)-Gly-Ala-Gly-）をコア配列〕を合成し，グリコールアルデヒドを反応させ，多種多様のAGE修飾体を得ることに成功した．さらに，このAGE修飾ペプチドをマウスへの免疫し，血清中の抗体価が上がったマウス得ることができた．マウスの脾臓より，RT-PCR法によって，IgG抗体の重鎖および軽鎖Fv遺伝子ライブラリーを作製し，scFv遺伝子ライブラリーの調製にも成功した．現在，ファージディスプレイ法によるスクリーニング進めており，今年度中には，目的のAGEを識別する組換え型scFv抗体を獲得できるものと考えている．以上，ほぼ計画通りに研究は進展している．
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| 今後の研究の推進方策 |
申請書での計画通り，研究を推進する．研究費に関して，平成23年度に未使用額があるが，少ない（952円）ので，計画変更は行わない．
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| 次年度の研究費の使用計画 |
申請書での計画通りに使用する．
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