| 研究課題/領域番号 |
23659057
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| 研究機関 | 熊本大学 |
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研究代表者 |
森岡 弘志 熊本大学, 大学院生命科学研究部, 教授 (20230097)
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| 研究分担者 |
諏訪 喜昭 熊本大学, 薬学部, 特任助教 (50516127)
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| キーワード | AGE認識抗体 / 分子進化工学 / ファージディスプレイ / scFv抗体 / 低分子抗原 / デンドリマー型ペプチド / SPRバイオセンサー / 熱力学的解析 |
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| 研究概要 |
タンパク質の糖化反応生成物であるAGE（Advanced Glycation Endproducts）は，多種多様な構造を持つ低分子量の翻訳後修飾体である．糖尿病関連疾患の研究を進める上で抗AGEモノクローナル抗体は有用であるが，エピトープであるAGEが低分子化合物であり，様々なタンパク質分子上に生成するため，従来の方法では特異性ならびに結合性が高い抗AGEモノクローナル抗体を作製するのは困難である．そこで本研究では，化学的にAGE修飾した合成ペプチド（デンドリマー型ペプチド）と分子進化工学の手法を用いて，特にGA-pyridineと呼ばれるAGEに対して，特異性ならびに結合性が高い遺伝子組換え型抗体（一本鎖抗体；scFv）の開発研究を行った．
１．デンドリマー型ペプチドを免疫したマウスから抗体可変領域（Fv）遺伝子ライブラリーの作製して，ファージディスプレイ法によるスクリーニングを行い，GA-pyridine高親和性scFvの獲得を進めているが，現時点では目標としている特性を持つクローンは得られていない．現在，条件を変えながら引き続きスクリーニングを続けている．
２．既にファージディスプレイ法により獲得しているGA-pyridineを認識するAGE73scFvをもとに，error-prone PCRによるランダム変異導入した遺伝子ライブラリーを作製した後，ファージディスプレイ法によりGA-pyridineに高親和性を示すAGE73scFv変異体のスクリーニングを行った．その結果，GA-pyridineを含むペプチドに対する結合活性が約2倍上昇し，結合活性の熱安定性が大きく向上したクローンを獲得することができた．さらに熱力学的解析を行い，本質的な抗原結合活性を解明した．本研究の方法により，今後進める生体内でのAGE探索系の開発に有用な抗体分子の獲得に成功した．
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