研究課題
本研究では、光感受性タンパク（光興奮性タンパク（チャネルロドプシン２）および光抑制タンパク（ハロロドプシン））をバゾプレッシンおよびオキシトシン（下垂体後葉ホルモン）を産生する神経分泌ニューロンにトランスジェニック技術を用いて強制発現させることにより、下垂体後葉ホルモンの新たな機能を明らかにすることを目的とした。本年度は、初年度に作成に着手したトランスジェニックラットの系統維持・繁殖を行い、得られた複数の系統について光感受性タンパクの発現を解剖学的および電気生理学的に検討した。具体的には、（１）バゾプレッシン遺伝子にチャネルロドプシン２-eGFP遺伝子もしくはチャネルロドプシン２-eGFP-ハロロドプシン-YFP融合遺伝子を導入したトランスジェニックラットの視床下部におけるeGFPもしくはYFPの蛍光タンパク発現を蛍光顕微鏡および共焦点レーザー顕微鏡を用いて観察することができた、（２）浸透圧刺激（脱水および2%食塩水の飲水負荷）によりこれらの蛍光タンパクの蛍光強度が増加した、（３）バゾプレッシンニューロンが局在する神経核の一つである視索上核から酵素処理により単離したニューロンにおいて光感受性タンパクの発現を蛍光タンパクを指標に蛍光顕微鏡下で同定することができた。さらに、そのようにして同定したニューロンからホールセルパッチクランプ法により膜電位を記録しながら光刺激をすることで生じる膜電位の変化を記録することができた。今後、オキシトシンニューロンについても同様のアプローチを行い、光操作にさらなる工夫が必要であると考えている。
すべて 2013 2012 その他
すべて 雑誌論文 (6件) (うち査読あり 6件) 学会発表 (7件) (うち招待講演 4件)
Journal of Neuroendocrinology
巻: in press ページ: in press
Stress
巻: 15(4) ページ: 435-442
10.3109/10253890.2011.637185
巻: 24(4) ページ: 539-553
10.1111/j.1365-2826.2011.02241.x
Brain Research
巻: 1479 ページ: 52-61
hppt://dx.doi.org/10.1016/j.brainres.2012.08.033
Pathophysiology
巻: 19 ページ: 283-298
hppt://dx.doi.org/10.1016/j.pathophys.2012.07.005
Journal of UOEH
巻: 34(4) ページ: 315-321
