ｍｉｃｒｏＲＮＡ導入によるｉＰＳ細胞樹立の試み

2012 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 23659148
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 渡邉 すみ子 東京大学, 医科学研究所, 特任教授 (60240735)
• キーワード: iPS / miRNA / MEF / RNA

研究概要

本研究では当初の計画としてはmiRNAのiPSにおける発現パターンをmRAP法をもちいて作成したライブラリーを用いて解析したものを使っていたが、qPCRをもちいて個々のmiRNAについて発現チェックをしていくうちに、このライブラリーの質に問題があることが明らかになり、qPCR アレイを用いて、新たにmiRNAの発現チェックをおこなった。ヒト、マウス合計20ライン近いiPSからライブラリーを作成し、バイオインフォマティクスを用いて、高発現miRNAを抽出し、これらについて発現ベクターを作成した。これをMEF, 未分化、embryoid bodyにそれぞれ発現させ、iPS樹立効率、未分化性維持、分化効率について検討をくわえた。複数のmiRNAで、これらの効率に影響をあたえるものが見いだされたが、過剰発現の効率、安定性に問題があり、ベクターを改変し、スポンジタイプのベクターを評価したところ安定した過剰発現が得られたので、このシステムに変更し、MEFからのiPS樹立に集中して、検討を続けている。iPSのmiRNAによる樹立は、本研究期間にも論文などで報告があったが、追試に問題があったり、効率が低いなど決め手となる技術開発にはいたっていない。本研究で確立した発現情報はきわめて質が高く、これをもちいて、単一のmiRNAではなく、複数のmiRNAを組み合わせて発現させることにより、安定したmiRNAによるiPSの樹立にいたることが期待される。

研究成果

• [雑誌論文] The early retinal progenitor-expressed gene Sox11 regulates the timing of the differentiation of retinal cells (2013)
  • 著者名/発表者名: Usui, A. et al.
  • 雑誌名: Development 巻: 140 ページ: 740-750
  • 査読あり
• [雑誌論文] In vitro cell subtype-specific transduction of adeno-associated virus in the mouse and marmoset retinal explant culture (2012)
  • 著者名/発表者名: Baba, Y., Satoh, S., Otsu, M., Sasaki, E., Okada, T., and Watanabe, S.
  • 雑誌名: Biochimie 巻: 94 ページ: 2716-2722
• [雑誌論文] Selection of RNA aptamers against mouse embryonic stem cells (2012)
  • 著者名/発表者名: Iwagawa, T et al.
  • 雑誌名: Biochimie 巻: 94 ページ: 250-257
  • 査読あり
• [雑誌論文] Serine/Threonine kinase Melk regulates proliferation and glial differentiation of retinal progenitor cells (2012)
  • 著者名/発表者名: Saito, R.et al.
  • 雑誌名: Can. Sci. 巻: 103 ページ: 42-49
  • 査読あり
• [雑誌論文] Transposon mutagenesis identifies genes that transform neural stem cells intoglioma-initiating cells (2012)
  • 著者名/発表者名: Koso, H. et al.
  • 雑誌名: Proc.Natl.Acad.Sci.,USA 巻: 109 ページ: 2998-3007
  • 査読あり
• [雑誌論文] Expression of Sox4 and Sox11 is regulated by multiple mechanisms during retinal development (2012)
  • 著者名/発表者名: Usui, A. et al.
  • 雑誌名: FEBS Letters 巻: 587 ページ: 358-363
  • 査読あり