次世代プロテオミクスを使った、ユビキチン化によるDNA修復制御機構の生化学的解析

2012 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 23659152
• 研究種目: 挑戦的萌芽研究
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 医化学一般
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 武田 俊一 京都大学, 大学院・医学研究科, 教授 (60188191)
• 研究分担者: 笹沼 博之 京都大学, 大学院・医学研究科, 准教授 (00531691)
• 研究期間 (年度): 2011 – 2012
• キーワード: プロテオミクス / ユビキチン / ユビキトーム / DNA修復 / 質量分析 / SILAC

研究概要

本研究は、ユビキチン化酵素(例、UBC13)の基質を同定することを最終目標にして、ニワトリDT40遺伝子破壊株にSILAC(Stable Isotope Labeling usingAmino Acids in Cell Culture)を応用する実験手法を樹立することを目的とする。我々は、SILAC ⇒ ユビキチン化ポリペプチドの濃縮 ⇒ 濃縮ポリペプチドの質量分析を実施する実験プロトコールを確立した。

研究成果

• [雑誌論文] Interference in DNAreplication can cause mitoticchromosomal breakage unassociatedwith double-strand breaks (2013)
  • 著者名/発表者名: Fujita M, Sasanuma H, Yamamoto KN,Harada H, Kurosawa A, Adachi N, OmuraM, Hiraoka M, Takeda S, Hirota K.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 8 ページ: e60043
  • DOI: DOI:10.1371/journal.pone.0060043
  • 査読あり
• [学会発表] 遺伝学的手法を応用した、新規抗がん剤のスクリーニングとその作用機序の解析 (2013)
  • 著者名/発表者名: 武田俊一
  • 学会等名: 金沢大学薬学シンポジウム2012-DNA損傷応答を標的とした革新的がん創薬研究-
  • 発表場所: 金沢
  • 年月日: 2013-02-19
• [学会発表] Genetic and Biocheicalevidence for translesion DNAsynthesis by replicative DNApolymerase delta (2012)
  • 著者名/発表者名: Takeda S
  • 学会等名: Gordon ResearchConference, Mutagenesis
  • 発表場所: Newport, USA
  • 年月日: 20120819-24
• [学会発表] Xpf and Mus81 are requiredto process homologous recombinationintermediates (2012)
  • 著者名/発表者名: Takeda S
  • 学会等名: EMBO Workshop,Structure-specific nucleases in DNAreplication and repair
  • 発表場所: Hyeres, France.
  • 年月日: 2012-09-19
• [学会発表] Complex functionalrelationship of the UBC13 E2ubiquitin conjugating enzyme, and theRAD18 and RNF8 E3 ubiquitin ligases,FASEB Summer Research Conferences (2011)
  • 著者名/発表者名: Takeda S
  • 学会等名: Genetic Recombination & GenomeRearrangements
  • 発表場所: Steamboat Springs, USA
  • 年月日: 20110724-29