タイト結合膜貫通分子オクルディンを標的としたＣ型肝炎の新規治療法の開発

2011 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 23659187
• 研究機関: 福島県立医科大学
• 研究代表者: 千葉 英樹 福島県立医科大学, 医学部, 教授 (00295346)
• 研究分担者: 冨川 直樹 福島県立医科大学, 医学部, 講師 (80468587)
• 研究期間 (年度): 2011-04-28 – 2013-03-31
• キーワード: C型肝炎

研究概要

Ｃ型肝炎ウィルス(HCV)感染は世界で１億７千万人、我が国では２００万人を超えると推定される。またHCV感染は高率に慢性化して肝硬変・肝癌に至る難治性疾患で、新たな予防・治療法の開発が急務である。最近、ヒトオクルディン (OCLN)がHCVの受容体の一つであること、その第二細胞外ドメイン (OCLN-EC2)がHCVの宿主細胞（ヒト肝細胞）への侵入・感染成立に必須であることが明らかになった。そこで本研究では、新規抗ヒトオクルディン単クローン抗体を作製し、HCVの感染防御に有効であるかを明らかにする。まず、ヒトOCLN-EC2のアミノ酸残基48個のうち、HCV結合部位と推定される１７アミノ酸配列に相当する合成ペプチドを抗原として、新規抗オクルディン単クローン抗体を作製した。次に、HCVに対する感受性の高いヒト肝がん細胞株Huh7.5.1を抗ヒトオクルディン単クローン抗体３１クローンのハイブリドーマ存在下・非存在下で培養して、２種類のHCV感染阻害実験（シュードタイプウィルスHCVpvおよびHCVcc）を行った。その結果、６クローンにおいてHCV感染の阻害が認められた。本研究の目的が達成されれば、ヒトOCLN-EC2を標的とするヒト型抗体の開発が可能となり、HCV感染に対する全く新しい予防・治療法確立への道が拓かれる。ひいては、Ｃ型慢性肝炎の肝硬変・肝癌への進展を防ぐことに繋がり、国民生活の質の向上や将来の医療費削減にとっても研究意義は極めて高い。

現在までの達成度 (区分)

1: 当初の計画以上に進展している

理由

平成２３年度においては、新規抗ヒトオクルディン単クローン抗体を作製した。加えて、平成２４年度の研究計画としていた「抗ヒトオクルディン単クローン抗体によるHCV感染防御の評価」についてもスクリーニングを終えたため。

今後の研究の推進方策

1. 抗オクルディン単クローン抗体の精製：HCV感染阻害が認められた６クローンの抗体を精製する。2. 抗オクルディン単クローン精製抗体によるHCV感染防御の評価：２種類のHCV感染阻害実験（シュードタイプウィルスHCVpvおよびHCVcc）を用いて評価する。3. 抗オクルディン単クローン精製抗体の正常ヒト細胞に及ぼす影響：新規抗オクルディン単クローン抗体の正常ヒト細胞の増殖・分化・極性に及ぼす影響、細胞傷害の有無について明らかにする。

次年度の研究費の使用計画

申請書の記載に従い、消耗品費、旅費、英文校閲にかかる謝金、学会誌投稿料に使用する。

研究成果

• [雑誌論文] The transient potential channel TRPV6 is dynamically expressed in bone cells but in not crucial for bone mineralization in mice (2012)
  • 著者名/発表者名: van der Eerden BC, Weissgerber P, Fratzl-Zelman N, Olausson J, Hoenderop JG,Schreuders-Koedam M, Eijken M, Roschger P, de Vries TJ, Chiba H, Klaushofer K, Flockerzi V, Bindels RJ, Freichel M, van Leeuwen JP
  • 雑誌名: J Cell Physiol 巻: 227 ページ: 1951-1959
• [雑誌論文] Claudin-4-targeted therapy using Clostridium Perfringens enterotoxin for prostate cancer (2012)
  • 著者名/発表者名: Maeta T
  • 雑誌名: Prostate 巻: 72 ページ: 351-360
  • DOI: 10.1002/pros.21436
  • 査読あり
• [雑誌論文] Laminin alpha1 is essential for mouse cerebellar development (2012)
  • 著者名/発表者名: Ichikawa- Tomikawa N
  • 雑誌名: Matrix Biol 巻: 31 ページ: 17-28
  • DOI: 10.1016/j.matbio.2011.09.002
  • 査読あり
• [雑誌論文] IFNbeta impairs extracellular matrix formation leading to inhibition of mineralization by effects in the early stage of human osteoblast differentiation (2012)
  • 著者名/発表者名: Woeckel VJ
  • 雑誌名: J Cell Physiol 巻: 227 ページ: 2668-2676
  • DOI: 10.1002/jcp.23009
  • 査読あり
• [雑誌論文] Opposing actions of rosiglitazone and resveratrol on mineralization in human vascular smooth muscle cells (2011)
  • 著者名/発表者名: Bruedigam C, Eijken M, Koedam M, Chiba H, van Leeuwen JP
  • 雑誌名: J Mol Cell Cardiol 巻: 51 ページ: 862-871
• [雑誌論文] Possible involevement of tight junctions, extracellular matrix and nuclear receptors in epithelial differentiation (2011)
  • 著者名/発表者名: Ichikawa-Tomikawa N, Sugimoto K, Satohisa S, Nishiura K, Chiba H
  • 雑誌名: J Biomed Biotechnol 巻: 2011 ページ: 253048
  • 査読あり
• [備考]
  • URL: http://www.fmu.ac.jp/home/p2/index.html