タイト結合膜貫通分子オクルディンを標的としたＣ型肝炎の新規治療法の開発

2012 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 23659187
• 研究機関: 福島県立医科大学
• 研究代表者: 千葉 英樹 福島県立医科大学, 医学部, 教授 (00295346)
• 研究分担者: 冨川 直樹 福島県立医科大学, 医学部, 講師 (80468587)
• キーワード: タイト結合 / C型肝炎ウィルス / 感染症 / 肝癌 / トランスレーショナルリサーチ / 抗体医薬

研究概要

Ｃ型肝炎ウィルス(HCV)感染の治療としては現在、インターフェロンと抗ウィルス薬リバビリンの併用療法が行われているが、著効率は約50％で、副作用の面からも満足できるものではない。一方2009年に、タイト結合膜貫通分子オクルディンがHCVの受容体の一つで、HCVの宿主細胞（ヒト肝細胞）への侵入・感染成立に必須であることが明らかになった。そこで本研究では、新規抗ヒトオクルディン単クローン抗体を作製し、HCVの感染防御に対する有効性とヒト細胞への毒性作用を検証した。
まず、HCVに対する感受性の高いヒト肝がん細胞株Huh7.5.1を新規抗体31種類のハイブリドーマ存在下・非存在下で培養して、免疫染色、ウエスタンブロッド、HCV感染阻害実験（シュードタイプウィルスHCVpvおよびHCVcc）を行い、抗体をスクリーニングした。
候補となった抗体5種類から15クローンを精製し、毒性試験、感染阻害実験、蛍光ダイレクトラベリングによる生細胞蛍光イメージングを行った。精製抗体15クローンはいずれも、ヒト肝がん細胞株Huh7.5.1に対して毒性作用を示さなかった。Huh7.5.1細胞の単層培養では、精製抗体によるHCV感染阻害作用は明らかではなかった。しかし、蛍光ラベルした抗ヒトオクルディン単クローン精製抗体をダブルチャンバーの下部チャンバーに加えたところ、Huh7.5.1細胞の細胞境界にシグナルが検出され、新規抗体が生細胞のオクルディンに結合できることが示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] Evidence of vitamin D and interferon-beta cross-talk in human osteoblasts with 1,25-dihydroxyvitamin D3 and rosigliatazone synergistically osteoblast-mediated mineralization (2013)
  • 著者名/発表者名: Woeckel VJ
  • 雑誌名: Gene 巻: 512 ページ: 438-443
  • DOI: 10.1016/j.gene.2012.07.051
  • 査読あり
• [雑誌論文] 蛍光ダイレクトラベリングによる生細胞蛍光イメージング (2012)
  • 著者名/発表者名: 冨川(市川)直樹, 千葉英樹
  • 雑誌名: Surgery Frontier 巻: 19 ページ: 335-340
• [雑誌論文] The transient potential channel TRPV6 is dynamically expressed in bone cells but in not crucial for bone mineralization in mice (2012)
  • 著者名/発表者名: van der Eerden BC, Weissgerber P, Fratzl-Zelman N, Olausson J, Hoenderop JG,Schreuders-Koedam M, Eijken M, Roschger P, de Vries TJ, Chiba H, Klaushofer K, Flockerzi V, Bindels RJ, Freichel M, van Leeuwen JP
  • 雑誌名: J Cell Physiol 巻: 227 ページ: 1951-1959
• [雑誌論文] Stereotaxic injectionの手法と応用 (2012)
  • 著者名/発表者名: 冨川（市川）直樹
  • 雑誌名: Surgery Frontier 巻: 19 ページ: 445-450
  • 査読あり
• [雑誌論文] Claudin-4-targeted therapy using Clostridium Perfringens enterotoxin for prostate cancer (2012)
  • 著者名/発表者名: Maeta T
  • 雑誌名: Prostate 巻: 72 ページ: 351-360
  • DOI: 10.1002/pros.21436
  • 査読あり
• [雑誌論文] Laminin alpha1 is essential for mouse cerebellar development (2012)
  • 著者名/発表者名: Ichikawa- Tomikawa N
  • 雑誌名: Matrix Biol 巻: 31 ページ: 17-28
  • DOI: 10.1016/j.matbio.2011.09.002
  • 査読あり
• [雑誌論文] Evidence of vitamin D and interferon-beta cross-talk in human osteoblasts with 1,25-dihydroxyvitamin D3 being dominant over interferon-beta in stimulating mineralization (2012)
  • 著者名/発表者名: Woeckel VJ
  • 雑誌名: J Cell Physiol 巻: 227 ページ: 3258-3266
  • DOI: 10.1002/jcp.24020
  • 査読あり
• [雑誌論文] IFNbeta impairs extracellular matrix formation leading to inhibition of mineralization by effects in the early stage of human osteoblast differentiation (2012)
  • 著者名/発表者名: Woeckel VJ
  • 雑誌名: J Cell Physiol 巻: 227 ページ: 2668-2676
  • DOI: 10.1002/jcp.23009
  • 査読あり
• [学会発表] Tight-junction protein claudin-6 provokes epithelial polarization and cell-cell junction formation in F9 stem cells (2012)
  • 著者名/発表者名: Sugimoto K
  • 学会等名: Tight junction symposium 2012
  • 発表場所: メキシコ
  • 年月日: 20121101-20121104
• [学会発表] Src family kinase involves in the differentiation of stem cells to epithelial cells (2012)
  • 著者名/発表者名: Ichikawa- Tomikawa N
  • 学会等名: Tight junction symposium 2012
  • 発表場所: メキシコ
  • 年月日: 20121101-20121104