人工多能性幹細胞由来自己反応性リンパ球を用いた自己免疫疾患霊長類モデルの開発

2013 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 23659201
• 研究機関: 滋賀医科大学
• 研究代表者: 伊藤 靖 滋賀医科大学, 医学部, 准教授 (90324566)
• 研究分担者: 小笠原 一誠 滋賀医科大学, 医学部, 教授 (20169163) ; 石垣 宏仁 滋賀医科大学, 医学部, 助教 (90432301)
• キーワード: iPS細胞 / 霊長類モデル / 自己免疫疾患 / 免疫学 / 病理学

研究概要

カニクイザルiPS細胞をbone morphogenetic protein-4 (BMP4)を含む培養液中で培養し、embryoid bodyを作製した。次にフィーダー細胞10T1/2上で、stem cell factor (SCF)及びvascular endothelial growth factor (VEGF)を加えて培養を続け、CD34陽性細胞を誘導した。セルソーターでCD34陽性細胞を精製し、Delta-like ligand 1を発現するフィーダー細胞OP9-DL1とともに培養した。この培養にはSCF、interleukin-7 (IL-7) 、fms-like tyrosine kinase 3 ligand (Flt3L)を加えた。
２週間後、フローサイトメーターで細胞表面分子の発現を解析したところ、CD3、CD4、CD8が陽性の細胞が見られた。CD4あるいはCD8が単独で陽性の細胞はほとんど見られず、正常胸腺に置けるCD4CD8 double positiveに相当すると考えられた。また、これらの細胞はTCRαβを発現していた。
CD4またはCD8 single positive細胞への分化を誘導するため、抗CD3抗体を加えたが、single positive 細胞の割合は増えなかった。また、カニクイザルBリンパ球細胞と培養したが、single positive 細胞の割合は増えなかった。しかし、さらにサイトカインを加え、培養を続けたところ、CD8 single positive細胞となった。この細胞を抗CD3抗体で刺激したところ、増殖反応が見られ、iPS細胞由来CD3陽性細胞は、機能的なTCRを発現し、Tリンパ球に分化したと考えられた。

研究成果

• [雑誌論文] Protection against H5N1 highly pathogenic avian and pandemic (H1N1) 2009 influenza virus infection in cynomolgus monkeys by an inactivated H5N1 whole particle vaccine (2013)
  • 著者名/発表者名: Nakayama M, Shichinohe S, Itoh Y, Ishigaki H, Kitano M, Arikata M, Pham VL, Ishida H, Kitagawa N, Okamatsu M, Sakoda Y, Ichikawa T, Tsuchiya H, Nakamura S, Le QM, Ito M, Kawaoka Y, Kida H, Ogasawara K
  • 雑誌名: PLoS ONE 巻: 8 ページ: e82740
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0082740
  • 査読あり
• [雑誌論文] Pathogenicity of pandemic H1N1 influenza A virus in immunocompromised cynomolgus macaques (2013)
  • 著者名/発表者名: Pham VL, Nakayama M, Itoh Y, Ishigaki H, Kitano M, Arikata M, Ishida H, Kitagawa N, Shichinohe S, Okamatsu M, Sakoda Y, Tsuch -iya H, Nakamura S, Kida H, Ogasawara K
  • 雑誌名: PLoS ONE 巻: 8 ページ: e75910
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0075910
  • 査読あり
• [学会発表] Pathogenicity of pandemic (H1N1) 2009 influenza A virus in immunosuppressed cynomolgus monkeys.
  • 著者名/発表者名: Itoh Y, Nakayama M, Ishigaki H, Ogasawara K
  • 学会等名: 第４２回日本免疫学会総会、学術集会
  • 発表場所: 幕張メッセ（千葉県）
• [備考] 滋賀医科大学疾患制御病理学部門研究業績
  • URL: http://www.shga-med.ac.jp/~hqpatho2/publication.html