ウイルス・プロテアーゼを利用した自然免疫活性化によるＣ型肝炎自殺療法の開発

2011 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 23659393
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 小池 和彦 東京大学, 医学部附属病院, 教授 (80240703)
• 研究期間 (年度): 2011-04-28 – 2013-03-31
• キーワード: ウイルス

研究概要

C型肝炎ウイルス（HCV）ゲノムによってコードされるタンパク分解酵素NS3/4aプロテアーゼが、retinoic acid-inducible gene (RIG)-IからIFNβ誘導へと至る自然免疫経路をミトコンドリア外膜に存在するIFN promoter-stimulator (IPS)-1の特異的切断によって無効化し、肝臓におけるIFN活性化システムの機能不全を引き起こすことが、HCV持続感染化やIFN治療への抵抗性の原因の一つであることが示されてきている。我々は、発想を転換し、このNS3/4aプロテアーゼを逆用して、IPS-1と同じ切断部位をもつ転写因子モジュール(HCV-protease activated module; CPAM)を肝細胞内に送り込む（不活性型CPAM）プロジェクトを企てた。切断部位を切断し転写因子を活性化することで細胞内の自然免疫系を活性化させ、肝臓からのHCV完全排除を導くという計画である　H23年度は、核内移行転写因子IRF7にミトコンドリア移行シグナル、およびIPS-1がもつNS3/4aプロテアーゼ切断モチーフであるC503アミノ酸残基を接続したモジュールであるCPAMを作製した。NS3/4aプロテアーゼを発現する非構造領域レプリコンの増殖するHuh-7細胞に導入してIRF7の核内移行を検証しているところである。また、CPAMを保持する組替えアデノウイルスも作製中である。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

当初の計画では、CPAMを保持する組替えアデノウイルス作製まで終了する予定であったが、CPAMの作製に予定よりも時間がかかったため、替えアデノウイルス作製が達成されなかった。この意味で、達成度は70％程度であったと考える。この理由は、IRF7にミトコンドリア移行シグナルを接続するテクニカルな問題のためであった。現在は、この問題は克服されており研究計画は遂行されている。

今後の研究の推進方策

研究計画書に沿って研究を遂行して行く。ただし、経費的な問題から動物を用いた実験よりも培養細胞を用いた実験を優先して、確実な成果を挙げていく。

次年度の研究費の使用計画

H２４年度は直接経費８０万円を使用予定である。潤沢な研究費とはいえないので、慎重に実験を遂行して成果を挙げる様に推進していく。特に、CPAM組換えアデノウイルスをHCV・JFH-1株の増殖するHuh-7細胞に感染させ、HCV増殖に対する効果を検討する実験については、確実な成果を挙げる。

研究成果

• [雑誌論文] A miRNA machinery component DDX20 controls NF-κB via microRNA-140 function (2012)
  • 著者名/発表者名: Takata A, Otsuka M, Yoshikawa T, Kishikawa T, Kudo Y, Goto T, Yoshida H, Koike K
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun 巻: 22445758 ページ: 1-5
  • DOI: [Epub ahead of print] PubMed PMID: 22445758
  • 査読あり
• [雑誌論文] Systemic combination therapy of intravenous continuous 5-fluorouracil and subcutaneous pegylated interferon alfa-2a for advanced hepatocellular carcinoma. (2012)
  • 著者名/発表者名: Uchino K, Obi S, Tateishi R, Sato S, Kanda M, Sato T, Arano T, Enooku K, Goto E, Masuzaki R, Nakagawa H, Asaoka Y, Kondo Y, Yamashiki N, Goto T, Shiina S, Omata M, Yoshida H, Koike K
  • 雑誌名: J Gastroenterol 巻: 22438097 ページ: 1-5
  • DOI: [Epub ahead of print] PubMed PMID: 22438097
  • 査読あり
• [雑誌論文] Mortality and morbidity of hepatectomy, radiofrequency ablation, and embolization for hepatocellular carcinoma: a national survey of 54,145 patients (2012)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Tateishi R, Yasunaga H, Horiguchi H, Yoshida H, Matsuda S, Koike K
  • 雑誌名: J Gastroenterol 巻: 22426637 ページ: 1-5
  • DOI: [Epub ahead of print] PubMed PMID: 22426637
  • 査読あり
• [雑誌論文] Serum level of adiponectin and the risk of liver cancer development in chronic hepatitis C patients (2011)
  • 著者名/発表者名: Arano T, Nakagawa H, Tateishi R, Ikeda H, Uchino K, Enooku K, Goto E, Masuzaki R, Asaoka Y, Kondo Y, Goto T, Shiina S, Omata M, Yoshida H, Koike K
  • 雑誌名: Int J Cancer 巻: 129(9) ページ: 2226-2235
• [雑誌論文] Characteristics of hepatocellular carcinoma nodules newly detected by computed tomography during arteriography and arterial portography: preliminary report of a randomized controlled trial (2011)
  • 著者名/発表者名: Ohki T, Tateishi R, Akahane M, Shiina S, Yamashiki N, Mikami S, Enooku K, Goto E, Masuzaki R, Kondo Y, Goto T, Inoo S, Ohtomo K, Omata M, Yoshida H, Koike K
  • 雑誌名: Hepatol Int 巻: 22020826 ページ: 1-5
  • DOI: [Epub ahead of print] PubMed PMID: 22020826
  • 査読あり
• [雑誌論文] Evaluation of molecular targeted cancer drug by changes in tumor marker doubling times (2011)
  • 著者名/発表者名: Enooku K, Tateishi R, Kanai F, Kondo Y, Masuzaki R, Goto T, Shiina S, Yoshida H, Omata M, Koike K
  • 雑誌名: J Gastroenterol 巻: 21935635 ページ: 1-5
  • DOI: [Epub ahead of print] PubMed PMID: 21935635
  • 査読あり
• [雑誌論文] Direct differentiation of hepatic cells from human induced pluripotent stem cells using a limited number of cytokines (2011)
  • 著者名/発表者名: Takata A, Otsuka M, Kogiso T, Kojima K, Yoshikawa T, Tateishi R, Kato N, Shiina S, Yoshida H, Omata M, Koike K
  • 雑誌名: Hepatol Int 巻: 21484132 ページ: 1-5
  • DOI: [Epub ahead of print] PubMed PMID: 21484132
  • 査読あり
• [学会発表] Hepatitis C virus NS5A protein impairs cytokine production through toll-like receptor signaling pathway in mouse liver (2011)
  • 著者名/発表者名: Takeya Tsutsumi, Seiko Shinzawa, Koji Goto, Hidetaka Fujinaga, Hideyuki Miyoshi, Yoshizumi Shintani, Kyoji Moriya, Hiroshi Yotsuyanagi, Tetsuro Suzuki, Yoshiharu Matsuura, Kazuhiko Koik
  • 学会等名: HCV2011
  • 発表場所: Seattle, USA
  • 年月日: 2011年9月9日