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初年度からの検討により、GFP-miR-33 decoyとDs-Red-miR-16 decoyが恒常的にP1-55細胞に発現する細胞株を得た。さらにここに遺伝子トラップベクターをレトロウイルスで導入した。このベクターにおいては、ポリA配列のない薬剤(Blasticidin)耐性遺伝子がゲノムにランダムに挿入されるため、薬剤耐性遺伝子を発現している細胞（Blasticidinに対して耐性を示す細胞）は、すべてレトロウイルスが内因性の遺伝子近傍に挿入され、内因性の遺伝子に変異をおこした細胞となっている。miR-33が低下している細胞を得るために、それらの細胞からGFPが上昇し、Ds-Redのレベルに変化のない細胞をFACSにてソーティングした。このP1-55細胞は、浮遊細胞であるため、限界希釈法により、シングルクローンを得た後、3’RACE法により、挿入変異を起こした遺伝子を確認した。複数の遺伝子の変異が得られたが、なかでもdownstream of tyrosin kinases 1(DOK1)遺伝子について着目した。実際にこのDOK1遺伝子欠損細胞においてはmiR-33の発現が低下しており、miR-33の宿主遺伝子である steroid response element binding protein 2（Srebp2）遺伝子の発現も低下していた。さらに、DOK1遺伝子欠損マウスにおいては、野生型のマウスと比較して、やせ形であり、脂肪細胞の分化が抑制されている一方、耐糖能が改善されていた。この表現型がmiR-33、Srebp2とどのような関係にあるかを詳細に検討する予定である。本法によって、従来の遺伝子トラップ法を改良することができ、目標とする遺伝子を簡便に同定することができることが示された。今後、疾患の本態解明に応用していく予定である。
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