研究課題
現在、臓器移植成績の向上を阻む最大の課題は、抗体関連拒絶反応である。抗体関連拒絶反応は、組織適合性抗原(HLA)ペプチドや血液型抗原及び異種糖鎖抗原が標的になる。我々は、それぞれの抗原に応答するB細胞が特徴的なフェノタイプや分化機構を示し、免疫抑制剤の感受性も大きく異なることをマウスモデルで解明した。本研究では、効率的なヒトB細胞活性化・分化モデルおよびヒューマナイズドマウスを確立し、これを用いて抗体関連拒絶反応に有用であると期待される我々が独自に開発した抗CD1d抗体（抗体拒絶反応抑制剤: 特願2009-110887）の特異性と感受性を解析し、B細胞の分化・増殖機構に即した新規抗体関連拒絶反応制御法を開発することを目的とする。 本年度は、効率的なヒトB細胞活性化・分化モデルを確立し、これを用いてプロテアソーム阻害剤と抗CD1d抗体の特異性と感受性を解析した。ヒト末梢血B細胞を抗IgM抗体F(ab)’の添加のもと培養しB細胞受容体(BCR)を架橋すると、B-1a細胞（CD19+CD11b+CD5+）への分化が確認された。BCRの架橋と共にLPSあるいはCPGを添加によりToll-like receptor4あるいは9へのシグナルを供給するとB-1b細胞（CD19+CD11b+CD5-）への分化誘導が確認された。ヒトCD40Lを発現させたマウス線維芽細胞(NIH-3T3)とIL-2/IL-4/IL-21も存在下で共培養するとB-2細胞（CD19+CD11b-CD5-）への分化誘導が確認された。以上のように、新たに確立したin vitro B細胞分化モデルを用い、我々が独自に開発したB-1細胞特異的抗体産生抑制剤（抗CD1d抗体）の特異性と感受性を解析した。今後、B細胞の分化・増殖機構に即した新規抗体関連拒絶反応制御法を開発につなげたい。
2: おおむね順調に進展している
ヒトB細胞活性化・分化in vitroモデルの確立は、計画通り順調に進展している。分化増殖したB細胞亜群をNOG/SCIDマウスの腹腔内に移入し生着させるヒトB細胞移入ヒューマナイズドマウスin vivoモデルも、おおむね順調に進展している。
平成２３年度に確立したヒトB細胞活性化・分化in vitroモデルおよびヒトB細胞移入ヒューマナイズドマウス in vivoモデルを用い、それぞれBortezomibを添加あるいは投与して、B細胞分化・増殖あるいは抗体産生能をIgMおよび各IgGサブクラス別に解析する予定である。また、抗ヒトCD1d抗体を添加あるいは投与して、B細胞分化・増殖あるいは抗体産生能をIgMおよび各IgGサブクラス別に解析する。これらは、当初予定していた研究で、計画通り推進可能と思われる。
研究計画はおおむね順調に進展しており、今後も当初予定していた計画通り推進可能と思われる。従って、経費使用計画の変更は予定していない。研究経費の大部分は、実験動物購入、細胞解析に必要な薬品や細胞分離・精製・培養に用いる試薬の購入費で占められ、これまでの我々の実績から慎重に積算した。
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