がん幹細胞を標的としたがん治療を実現するための新しいｍｉＲＮＡデリバリー法の開発

2013 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 23659626
• 研究機関: 東京医科大学
• 研究代表者: 上田 しのぶ 東京医科大学, 医学部, 助手 (00521874)
• 研究分担者: 黒田 雅彦 東京医科大学, 医学部, 教授 (80251304) ; 高梨 正勝 東京医科大学, 医学部, 講師(Lecture) (80312007) ; 大野 慎一郎 東京医科大学, 医学部, 助教 (90513680)
• キーワード: がん / microRNA / エキソソーム

研究概要

microRNA(miRNA)はがんの発生や抑制に関与しており、血中ではエキソソームによって運ばれている。また、がん幹細胞は現在の治療法では残存し再発や転移を起こす可能性がある。応募者らはがん幹細胞の増殖を抑制するmiRNAをエキソソーム中に取り込ませ、血中に投与することによってがんの治療ができると考えた。さらにがん幹細胞に結合する分子をエキソソーム膜上に発現させることにより、miRNAががん幹細胞内へ高率に侵入可能となると考えた。本研究ではエキソソームによるmiRNAの新しいデリバリー法を確立し、がん幹細胞を標的とした治療への応用を目指している。これまでに乳がん細胞膜に存在するEGFRに対するリガンド(EGFR結合ペプチド:GE11)をHEK293細胞に発現させ（GE11/HEK293細胞)、GE11/HEK293細胞の培養上清よりエキソソームを超遠心法によって精製したところ、GE11をエキソソーム膜上に発現させることことができた。このGE11ペプチドはEGFRに結合するが、下流のシグナルを活性化させないことが報告されている。GE11発現エキソソームは、より効率よく乳がん細胞(HCC-70)に接着し、取り込まれることを確認した。さらには乳がん幹細胞の維持に関与していることが報告されているlet-7aをGE11/HEK293細胞に導入することにより、let-7aを内包したGE11発現エクソソームを作製することができた (let-7a/GE11/HEK293)。マウスにヒト乳がん細胞(HCC-70)を移植し、作製したエキソソーム(let-7a/GE11/HEK293) を尾静脈より投与すると、がん細胞増殖抑制効果を示すことが明らかとなった。

研究成果

• [雑誌論文] Adult-specific systemic over-expression reveals novel in vivo effects of the soluble forms of ActRIIA, ActRIIB and BMPRII. (2013)
  • 著者名/発表者名: Yamawaki K, Ueda S, Okada T, Oshima T, Kakitani M, Kato T, Tomizuka K.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 8(10) ページ: e78076
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0078076.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Significant modulation of the hepatic proteome induced by exposure to low temperature in Xenopus laevis. (2013)
  • 著者名/発表者名: Nagasawa K, Tanizaki Y, Okui T, Watarai A, Ueda S, Kato T.
  • 雑誌名: Biology Open 巻: 2(10) ページ: 1057-69
  • DOI: 10.1242/bio.20136106.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Development of severe pathology in immunized pregnant mice challenged with lethal malaria parasites. (2013)
  • 著者名/発表者名: Mineo S, Niikura M, Inoue S, Kuroda M, Kobayashi F.
  • 雑誌名: Infect Immun. 巻: 81(10) ページ: 3865-71
  • DOI: 10.1128/IAI.00749-13.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Estrogen and estrogen receptor induce matrix metalloproteinase-26 expression in endometrial carcinoma cells. (2013)
  • 著者名/発表者名: Nishi H, Kuroda M, Isaka K
  • 雑誌名: Oncol Rep. 巻: 30(2) ページ: 751-6.
  • DOI: 10.3892/or.2013.2527.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Activin receptor-like kinase5 inhibition suppresses mouse melanoma by ubiquitin degradation of Smad4, thereby derepressing eomesodermin in cytotoxic T lymphocytes. (2013)
  • 著者名/発表者名: Yoon JH, Jung SM, Park SH, Kato M, Yamashita T, Lee IK, Sudo K, Nakae S, Han JS, Kim OH, Oh BC, Sumida T, Kuroda M, Ju JH, Jung KC, Park SH, Kim DK, Mamura M
  • 雑誌名: EMBO Mol Med. 巻: 5(11) ページ: 1720-39
  • DOI: 10.1002/emmm.201302524.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Correlation between number of renal cysts and aortic circumferences measured using autopsy material. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kurata A, Inoue S, Ohno S, Nakatsubo R, Takahashi K, Ito T, Kawasaki K, Kokubo R, Sakai T, Ubukata J, Matsubara S, Muraoka R, Yamazaki J, Hirose T, Hojo M, Watanabe E, Kuroda M.
  • 雑誌名: Pathol Res Pract. 巻: 209(7) ページ: 441-7
  • DOI: 10.1016/j.prp.2013.04.012.
  • 査読あり
• [学会発表] Lung cancer miRNA replacement therapy using novel class of miRNA (2013)
  • 著者名/発表者名: S Ohno, K Itano, Y Harada, M Takanashi, K Sudo, T Mizutani, M Kuroda.
  • 学会等名: アメリカ癌学会 国際会議 分子標的とがん治療
  • 発表場所: Boston､ MA, USA
  • 年月日: 20131019-20131024
• [学会発表] 新規のlipid conjugate RNAを用いたがん治療法の開発 (2013)
  • 著者名/発表者名: 黒田雅彦、高梨正勝、須藤カツ子
  • 学会等名: 第72回 日本癌学会総会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 20131003-20131005
• [学会発表] 高効率にがん抑制効果を発揮するmiR-34aの新規形状の探索 (2013)
  • 著者名/発表者名: 大野慎一郎、板野華連、柏迫幹絵、大木忠明、水谷隆之、須藤カツ子、高梨正勝、黒田雅彦
  • 学会等名: 第５回 日本RNA研究会
  • 発表場所: 広島
  • 年月日: 20130829-20130831
• [学会発表] ユーイング肉腫における新規構成RNAによるキメラがん遺伝子ノックダウン効果の検証 (2013)
  • 著者名/発表者名: 原田裕一郎、大野慎一郎、大木忠明、水谷隆之、須藤カツ子、高梨正勝、黒田雅彦
  • 学会等名: 第５回 日本RNA研究会
  • 発表場所: 広島
  • 年月日: 20130829-20130831
• [学会発表] microRNAの病理研究・治療への応用 (2013)
  • 著者名/発表者名: 黒田雅彦、村上善基、上田しのぶ、藤田浩司
  • 学会等名: 第102回 日本病理学会総会
  • 発表場所: 札幌
  • 年月日: 20130606-20130608
• [学会発表] 剖検症例の冠動脈を用いた肥厚内膜の免疫組織化学的検討 (2013)
  • 著者名/発表者名: 堀田綾子、倉田厚、齋藤生朗、黒田雅彦
  • 学会等名: 第102回 日本病理学会総会
  • 発表場所: 札幌
  • 年月日: 20130606-20130608
• [学会発表] 胃癌細胞株における上皮間葉移行に関与するマイクロRNAとその標的の検出 (2013)
  • 著者名/発表者名: 倉田厚、山田正俊、橋本浩次、呉偉紅、那日蘇、藤田浩司、大野慎一郎、高梨正勝、黒田雅彦
  • 学会等名: 第102回 日本病理学会総会
  • 発表場所: 札幌
  • 年月日: 20130606-20130608
• [学会発表] 新規核酸を用いた血管新生網膜症に対する分子標的治療法の開発 (2013)
  • 著者名/発表者名: 高梨正勝、須藤カツ子、松永芳径、石川章夫、大木忠明、濱崎智洋、後藤浩、黒田雅彦
  • 学会等名: 第102回 日本病理学会総会
  • 発表場所: 札幌
  • 年月日: 20130606-20130608
• [学会発表] 前立腺癌におけるmicroRNA-200cの発現解析 (2013)
  • 著者名/発表者名: 山田正俊、大野慎一郎、藤田浩司、倉田厚、黒田雅彦
  • 学会等名: 第102回 日本病理学会総会
  • 発表場所: 札幌
  • 年月日: 20130606-20130608
• [学会発表] 細気管支肺胞上皮癌におけるRASとlet-7の発現の特徴 (2013)
  • 著者名/発表者名: 藤田浩司、仲矢丈雄、池田徳彦、黒田雅彦
  • 学会等名: 第102回 日本病理学会総会
  • 発表場所: 札幌
  • 年月日: 20130606-20130608
• [備考] Department of Molecular Pathology Kuroda's Lab
  • URL: http://www.tokyo-med.ac.jp/molpathol/