| 研究課題/領域番号 |
23659877
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
豊澤 悟 大阪大学, 歯学研究科(研究院), 教授 (30243249)
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| 研究分担者 |
佐伯 万騎男 大阪大学, 歯学研究科(研究院), 講師 (30273692)
佐藤 淳 大阪大学, 歯学研究科(研究院), 講師 (70335660)
宇佐美 悠 大阪大学, 歯学部附属病院, 助教 (80444579)
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| 研究期間 (年度) |
2011-04-28 – 2013-03-31
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| キーワード | 線維性骨異形成症 / GNAS1遺伝子 / 骨髄間質細胞 / 同所性移植 / マウスモデル |
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| 研究概要 |
線維性骨異形成症(FD)は全身骨格の中で、顎骨に高い頻度で発症する腫瘍様骨病変であり、骨の変形や病的骨折を引き起こす。近年、GNAS1遺伝子の変異によるFDの発症機序が解明され、遺伝子診断が可能になり、FDの病態科学は飛躍的に進歩した。しかし、その治療法は未だに外科的切除であり、病態科学の進歩は治療には活用されていない。 当該年度は、GNAS1変異遺伝子を用いて人工的なFD細胞株を作製するため、ベクターに挿入したヒトの正常GNAS1遺伝子を、その翻訳産物Gsαのコドン201番のArgがCysやHisに置換する変異を導入し、変異GNAS1遺伝子を作製した。次に、このHis置換の変異GNAS1遺伝子を細胞に過剰発現させるために遺伝子組換えして、変異GNAS1遺伝子を過剰発現するレンチウイルスベクターを作製した。 ヒトFD組織を得る機会があったので、既に倫理委員会にて許可されている遺伝子チェックを、リアルタイムPCRを用いる新規方法にて検討した。その結果、GNAS1遺伝子の変異を従来法より簡便に検出できることが分かった。次年度に骨疾患サンプルが得られたときに、迅速な変異GNAS1遺伝子の診断が可能になり、ヒトFD組織の獲得に有利になると考えられた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
骨組織からの骨髄間質細胞の分離・採取に手間取っており、多くの量の骨髄間質細胞を抗体を用いて分離・採取する手法の改良と、分離・採取後の様々な細胞のコンタミネーションが大きな問題となっている。
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| 今後の研究の推進方策 |
CD146をマーカーにして骨髄間質細胞を分離・採取する予定であるが、困難な場合は、その代わりに、既に株化された骨髄間質細胞株を使用して、変異GNAS1遺伝子の過剰発現細胞株を作製する。しかし、骨髄間質細胞株では、細胞内cAMPが上昇しないなどの問題が生じた場合は、大学の共同施設設置のセルソーターを用いて純粋なCD146陽性の骨髄間質細胞を分離・採取して、その初代培養細胞を用いる。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
研究費使用の第１の目的は、本実験目的に使用できる骨髄間質細胞株を購入することと、マウスの骨髄から骨髄間質細胞を分離・採取するために用いる。第２の目的は、前述の実験が成功すれば、作製した変異GNAS1遺伝子過剰発現細胞が細胞内cAMPを上昇させるか等の細胞の特徴を解析することと、ヒトの線維性骨異形成症の簡便な遺伝子診断法の改良に用いる。第３の目的は、前述の実験が成功すれば、ヌードマウスの移植実験とその解析のために用いる。
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