| 研究課題/領域番号 |
23659929
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
佐藤 明 北海道大学, 大学病院, 講師 (90271684)
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| 研究分担者 |
東野 史裕 北海道大学, 歯学研究科(研究院), 准教授 (50301891)
北村 哲也 北海道大学, 歯学研究科(研究院), 助教 (00451451)
樋田 京子 北海道大学, 歯学研究科(研究院), 特任准教授 (40399952)
進藤 正信 北海道大学, 歯学研究科(研究院), 教授 (20162802)
戸塚 靖則 北海道大学, 歯学研究科(研究院), 名誉教授 (00109456)
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| キーワード | 口腔がん / HPV / ARE-mRNA / E6 / E7 / 核外輸送 / 核外輸送 |
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| 研究概要 |
本研究では、口腔がん細胞で起こっているARE-mRNA輸送・安定化のメカニズムを背景として、ヒトパピローマウイルス（HPV）感染によってがん化された口腔がん細胞でも、ARE-mRNAの核外輸送・安定化が起こっているか、またそのことが本当に発がんに関わるのか検討することを目的とする。
これまでにHPVがそのがん化に関わっているHeLa細胞を用いて、ARE-mRNAが核外輸送され、かつ安定化されていることを確認した。本年度は昨年度に引き続きHPVの持つがん遺伝子E6、E7がこのARE-mRNAの輸送・安定化に関係があるか検討するため、E6およびE7を細胞に導入しARE-mRNAの発現に変化があるか検討した。さらにARE-mRNAの輸送・安定化に重要な役割を果たすRNA結合タンパクHuRをノックダウンし、ARE-mRNAの変化を検討するとともに、がん細胞の性質が変化するかも確認した。
１．HPVのE6、E7によるARE-mRNAの核外輸送・安定化：正常細胞にHPV16型HPVのE6、E7の発現ベクターを導入し、ARE-mRNAの輸送・安定化を検討した。その結果、c-fos mRNAに関してその発現の上昇がみられ、c-myc、COX-2 mRNAは変化がなかった。また、HPVが原因でない子宮頸がん細胞C33Aに同様の実験を行ったところ、同様にc-fos mRNAの安定化が認められた。
２．HuRをノックダウンした時のHeLa細胞の性質：HeLa細胞にHuRのsiRNAを導入し、HuRタンパクをノックダウンすると、ARE-mRNAの安定化が阻害された。さらにノックダウンした細胞は軟寒天培地中でその増殖が低下し、足場非依存性増殖能が減弱した。
以上の結果より、HPVの感染によりARE-mRNAの一部が安定化され、そのことががん細胞の形質に影響を与えることが明らかになった。
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