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2012 年度 実績報告書

DNAメチル化解析による培養間葉系幹細胞のミニマム・リプログラミング技術の開発

研究課題

研究課題/領域番号 23659938
研究機関東京大学

研究代表者

星 和人  東京大学, 医学部附属病院, 准教授 (30344451)

研究分担者 高戸 毅  東京大学, 医学部附属病院, 教授 (90171454)
森 良之  東京大学, 医学部附属病院, 准教授 (70251296)
藤原 夕子  東京大学, 医学(系)研究科(研究院), 特任助教 (50466744)
キーワード骨再生医療 / MSC / メチル化 / リプログラミング
研究概要

培養に伴う細胞劣化によるDNA メチル化変動部位の同定をおこなった。MSCはSDラット4週齢オスの両側大腿骨及び脛骨より単離し、ノンコートディッシュに播種、増殖培地(DMEM+10%FBS+1ng/mL bFGF)にて培養した。ラット4匹より回収した細胞を1ロットとし、これを6回繰り返した。P0およびP2でDNAの回収(Qiagen DNeasy Blood& Tissue kit)を行った。DNAについては、メチレーションアレイ(Nimblegen)にて15061のプロモーター領域について網羅的メチル化解析を行った。サンプルの解析にあたり、Roche納品データにてメチル化ピーク値を検出した領域のうち転写開始点より300bp以内の遺伝子77個を絞り込み、さらにP2/P0のピーク値の比が4/6ロット以上で低下しているないし3/6ロット以上で増加している22遺伝子を絞り込んだ。このうち、MSCにおいて継代により発現傾向に変化がある遺伝子をPCRにて同定した。実際の骨・軟骨分化誘導効率については、ペレットを作製し、1本あたり22万細胞を15mLコニカルチューブに遠心した。ペレットの培養にあったっては、軟骨分化誘導培地を1.5mL添加し、1回培地を半量交換したのち1週間培養後にサンプルを回収し、IsogenにてRNAを回収した。リアルタイムPCR(Sybergreen)にて遺伝子発現を定量評価し、軟骨分化マーカーであるaggrecanやcol2および軟骨初期分化マーカーsox9の発現がP0よりもP2で低下するロットを認め、継代数が進むにつれて分化誘導に抵抗性を示すことが確認され、細胞劣化が検証された。

  • 研究成果

    (22件)

すべて 2013 2012 その他

すべて 雑誌論文 (13件) (うち査読あり 13件) 学会発表 (6件) (うち招待講演 5件) 図書 (1件) 備考 (1件) 産業財産権 (1件) (うち外国 1件)

  • [雑誌論文] Nanog promotes osteogenic differentiation of the mouse mesenchymal cell line C3H10T1/2 by modulating bone morphogenetic protein (BMP) signaling.2013

    • 著者名/発表者名
      Ogasawara, T.
    • 雑誌名

      J Cell Physiol

      巻: 228 ページ: 163-171

    • DOI

      10.1002/jcp.24116

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Tissue responses against tissue-engineered cartilage consisting of chondrocytes encapsulated within non-absorbable hydrogel.2013

    • 著者名/発表者名
      Kanazawa, S.
    • 雑誌名

      J Tissue Eng Regen Med

      巻: 7 ページ: 1-9

    • DOI

      10.1002/term.458

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Secondary repair of an oblique facial cleft with absorbable mesh tray and particulate cancellous bone and marrow.2012

    • 著者名/発表者名
      Sugiyama, M.et al
    • 巻
      9巻
    • ページ
      63-66
    • DOI

      doi:10.1016/S1348-8643(12)00030-4

    • 査読あり
  • [雑誌論文] The efficacy of dental therapy for an adult case of Henoch–Schonlein purpura.2012

    • 著者名/発表者名
      Abe, M.
    • 雑誌名

      Oral Science International

      巻: 9 ページ: 59-62

    • DOI

      10.1016/S1348-8643(12)00027-4

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Application of floating cells for improved harvest in human chondrocyte culture.2012

    • 著者名/発表者名
      Yonenaga, K.
    • 雑誌名

      Biomed Res

      巻: 33 ページ: 281-289

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Feasibility and limitations of the round robin test for assessment of in vitro chondrogenesis evaluation protocol in a tissue-engineered medical product.2012

    • 著者名/発表者名
      Yokoi, M.
    • 雑誌名

      J Tissue Eng Regen Med

      巻: 6 ページ: 550-558

    • DOI

      10.1002/term.460

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Matrix remodeling and cytological changes during spontaneous cartilage repair.2012

    • 著者名/発表者名
      Yanagisawa, H.
    • 雑誌名

      J Electron Microsc (Tokyo)

      巻: 61 ページ: 237-248

    • DOI

      10.1093/jmicro/dfs044

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Evaluation of the implant type tissue-engineered cartilage by scanning acoustic microscopy.2012

    • 著者名/発表者名
      Tanaka, Y.
    • 雑誌名

      J Biosci Bioeng

      巻: 113 ページ: 252-257

    • DOI

      10.1016/j.jbiosc.2011.10.011

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Inhibition of insulin-like growth factor-1 (IGF-1) expression by prolonged transforming growth factor-beta1 (TGF-beta1) administration suppresses osteoblast differentiation.2012

    • 著者名/発表者名
      Ochiai, H.
    • 雑誌名

      J Biol Chem

      巻: 287 ページ: 22654-22661

    • DOI

      10.1074/jbc.M111.279091

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Mandibular body ostectomy for correction of mandibular prognathism - a technical note.2012

    • 著者名/発表者名
      Mori, Y.
    • 雑誌名

      Oral Science International

      巻: 9 ページ: 21-25

    • DOI

      10.1016/S1348-8643(12)00005-5

    • 査読あり
  • [雑誌論文] BMP-2 embedded atelocollagen scaffold for tissue-engineered cartilage cultured in the medium containing insulin and triiodothyronine--a new protocol for three-dimensional in vitro culture of human chondrocytes.2012

    • 著者名/発表者名
      Ko, E. C.
    • 雑誌名

      Tissue Eng Part C Methods

      巻: 18 ページ: 374-386

    • DOI

      10.1089/ten.TEC.2011.0217

    • 査読あり
  • [雑誌論文] The development of a serum-free medium utilizing the interaction between growth factors and biomaterials.2012

    • 著者名/発表者名
      Iwata, K.
    • 雑誌名

      Biomaterials

      巻: 33 ページ: 444-454

    • DOI

      10.1016/j.biomaterials.2011.09.056

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Early-stage foreign body reaction against biodegradable polymer scaffolds affects tissue regeneration during the autologous transplantation of tissue-engineered cartilage in the canine model.2012

    • 著者名/発表者名
      Asawa, Y.
    • 雑誌名

      Cell Transplant

      巻: 21 ページ: 1431-1442

    • DOI

      10.3727/096368912X640574

    • 査読あり
  • [学会発表] OPTIMAL COMBINATIONS OF SCAFFOLDS AND GROWTH FACTORS FOR TISSUE ENGINEERING OF CARTILAGE2013

    • 著者名/発表者名
      K. Hoshi
    • 学会等名
      Osteoarthritis Research Society International
    • 発表場所
      Philadelphia(米国)
    • 年月日
      20130420-20130420
    • 招待講演
  • [学会発表] Innovation of Cartilage Regenerative Medicine by Implant-type Tissue-engineerd Cartilage2013

    • 著者名/発表者名
      星 和人
    • 学会等名
      第12回日本再生医療学会
    • 発表場所
      パシフィコ横浜 横浜市
    • 年月日
      20130321-20130323
    • 招待講演
  • [学会発表] 自己血清を軟骨再生医療の臨床展開と安全性確保の試み2013

    • 著者名/発表者名
      星 和人
    • 学会等名
      第12回日本再生医療学会
    • 発表場所
      パシフィコ横浜 横浜市
    • 年月日
      20130321-20130323
    • 招待講演
  • [学会発表] Research and Development of Self-maturating Device for Cartilage Regeneration That Makes Active Use of Biological Factors in Host Environment2013

    • 著者名/発表者名
      星 和人
    • 学会等名
      第12回日本再生医療学会
    • 発表場所
      パシフィコ横浜 横浜市
    • 年月日
      20130321-20130323
    • 招待講演
  • [学会発表] 再生医療と生殖補助医療との相互補完は可能か― 生殖補助医療の現状に学ぶ2013

    • 著者名/発表者名
      星 和人
    • 学会等名
      第12回日本再生医療学会
    • 発表場所
      パシフィコ横浜 横浜市
    • 年月日
      20130321-20130323
    • 招待講演
  • [学会発表] 生分解性ポリマー足場素材を用いたインプラント型再生軟骨の研究開発と臨床導入2013

    • 著者名/発表者名
      星 和人
    • 学会等名
      第12回日本再生医療学会
    • 発表場所
      パシフィコ横浜 横浜市
    • 年月日
      20130321-20130323
  • [図書] 再生医療叢書 第6巻 骨格系 第2章 軟骨細胞を使った軟骨再生(顎・顔面)2012

    • 著者名/発表者名
      星 和人
    • 総ページ数
      200
    • 出版者
      朝倉書店
  • [備考] 東京大学大学院医学系研究科 軟骨・骨再生医療寄付講座(富士ソフト)

    • URL

      http://square.umin.ac.jp/ct-e/t-e/index.html

  • [産業財産権] 生理活性因子を固定する混合ハイドロゲルと細胞機能向上のための培養方法2013

    • 発明者名
      星 和人 ほか
    • 権利者名
      東京大学 ほか
    • 産業財産権種類
      特許
    • 産業財産権番号
      61/769360
    • 出願年月日
      2013-02-26
    • 外国

URL: 

公開日: 2014-07-24   更新日: 2018-11-21  

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