| 研究課題/領域番号 |
23659971
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| 研究機関 | 神奈川歯科大学 |
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研究代表者 |
赤坂 徹 神奈川歯科大学, 歯学部, 助教 (60316263)
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| キーワード | Vmesニューロン / 咬筋筋紡錘 / GABA(A)受容体 / RT-PCR / splicing variant / 咀嚼運動 |
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| 研究概要 |
平成２４年度は三叉神経中脳路核(Vmes)ニューロンに発現しているGABA(A)受容体のmRNAについての解析を行った。GABA(A)受容体は５つのサブユニットから構成される５量体であり、サブユニットの構成により受容体としての機能が異なることが報告されている。Vmesニューロンではα２、５、β１、γ１、２の構成比率が一番多いと報告されていることからこれらのサブユニットのmRNAについて平成２３年度と同様に解析を加えた。平成２３年度に行った各サブユニットのmRNAの解析では生後４～７日のラットでは全てのサブユニットのmRNAがRT-PCR法にて検出され、生後５週齢のラットではα２サブユニットのmRNAが検出されないという結果を得ていたため、本年度はこの結果を確定するために例数を増やし、解析を行った。その結果、５週齢ラットのα２サブユニットのmRNAはいずれの場合も検出されなかったが、その他のα５、β１、γ１、２のサブユニットについては検出されたり、されなかったりと不安定な状況であった。このためアニーリングの温度や反応時間、PCRのサイクル数を変えたりと条件設定に数か月を要した。また、同時にα２サブユニットは５００程度の塩基数でバンドが現れるようにプライマーを設計しているが、２５０塩基数あたりにバンドが頻出するため、このバンドのシークエンスを解析するため、準備を進めていた。また、同時にα２サブユニットのmRNAがsplicing variantを生じているため想定している塩基数の位置にバンドが認められない可能性が考えられたため、１３００程のα２サブユニットのmRNAの全塩基配列を生後４～７日のラットと５週齢のラットについてシーケンサーにて解析を行うようにPCR法での増幅を進めている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
当初計画では平成２４年度に分子生物学的解析を行い、GABA(A)受容体サブユニットのmRNAの解析を終了している予定であった。ラットの生後４～７日齢群、固形食５週齢群、粉末食５週齢群それぞれの例数を増やし、解析を行ったところ、各サブユニットのmRNAが検出されたりされない場合があったりで非常に不安定であった。このため、アニーリングの温度や反応時間、PCRのサイクル数を変えたりと条件設定を行うのに数カ月を要した。現在はかなり安定した結果を出せるようになってきているが、一定の傾向を認める段階には至っていない。このため、さらに例数を増やしたり、別の受容体での変化を検討している。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後は特に５週齢でmRNAが検出されなかったGABA(A)受容体のα２サブユニットの全シークエンスの解析を進め、α２サブユニットのsplicing variantの有無について解析を加える予定である。しかし、RT-PCR法にて安定した結果が得られない可能性も考えられる。近年、抑制性の神経伝達物質は早期にグリシンに替わるとの報告が見られることから、Vmesニューロンでは生後、GABA(A)受容体は次第に少なくなり、グリシン受容体の発現が次第に強くなる可能性も考えられる。このため、Vmesニューロンにおけるグリシン受容体の解析について検討している。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
消耗品と旅費が主な使途である。
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