研究概要 |
骨芽細胞前駆細胞が骨芽細胞へと分化する一連の過程において、必須の分化調節因子であるWnt/β-catenin経路・Runx2・Osxとそれらの標的遺伝子により形成される転写ネットワークを解明し、上記の分子群が骨形成を制御するメカニズムを分子レベルから個体レベルに渡って明らかにすることにより、骨再生医療へと展開する基礎的知見を収集することが本研究の最終目標である。この目標を達成するために、クロマチン免疫沈降-シーケンス法(ChIP-seq)とマイクロアレイ、およびバイオインフォマティックスの手法を用いたデータ解析を行う。 1.Biotin-3xFLAGタグノックインマウスの作出 初代細胞を用いた効率的なChIPを行うため、Biotin-3xFLAG複合タグ(BioFLタグ)がRunx2,Osx,β-cateninの各遺伝子座C末に挿入されたノックインマウス3系統を、ES細胞の遺伝子ターゲティングによりそれぞれ作出した。各系統についてF2世代のホモノックインマウスを得た。現在までに、Biotinタグのビオチン化に必要な大腸菌のビオチンリガーゼBirAを全身性に発現するノックインマウス(Rosa26^<Bira/BirA>)と交配し、BioFLタグとBirAの複合ヘテロノックインマウスまで得ている。 2.β-catenin,Runx2,Osxに対するChIP-seq 上記の複合ヘテロノックインマウスの新生仔の頭蓋骨から骨芽細胞・前駆細胞を採取し、細胞において、β-catenln、Runx2、Osxに対するChIPを抗FLAG抗体及びストレプトアビジンビーズを用いて行う。Solexa Genome Analyzerによるシーケンシングを行い、ChIPDNAの配列データを得ており、現在データの解析を進めている。
|