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2013 年度 実績報告書

レトロウイルスベクターの細胞特異的組み込み領域の解析

研究課題

研究課題/領域番号 23701099
研究機関信州大学

研究代表者

吉野 和寿  信州大学, 医学部, 助教 (40551859)

キーワードレトロウイルスベクター / X連鎖重症複合免疫不全症 / insertional mutagenesis / IL-2レセプターγ鎖 / 遺伝子治療
研究概要

遺伝子治療による治療の完全な成功例は、2000年に報告されたMLVベクターに組み込んだIL-2レセプターγc鎖によるX連鎖重症複合免疫不全症の治療である。しかし、成功のわずか2年後に治療を受けた小児が白血病を発症した。insertional mutagenesisによる
原がん遺伝子、LMO2の活性化が発癌に大きく関わっていると推定されている。これまでLMO2遺伝子近傍へのベクター挿入確率を含め、個々の遺伝子のプロモーター領域のベクター組込みの定量的解析は行われていない。従って本研究は、遺伝子のプロモーター領域に的を絞った定量的ベクター組込み解析としては初めての試みとなる。これまで報告してきたようにPCR法を応用した本方法で、ようやくプロモーター領域を解析出来る基盤が整ったが、プロモーター領域を一つずつ解析するので、他のプロモーター領域との比較、特に染色体上の多数のプロモーター領域を包括的に解析することは困難を伴う。近年次世代シークエンサーの活用が進展してきたことから、次世代シークエンサーを用いて、ウイルスベクター挿入部位の網羅的検出系の開発を試みた。ヒトTリンパ球株細胞に挿入されたウイルスベクターの配列を次世代シークエンサーで解読することで、ゲノムにおけるベクター挿入部位の決定が技術的に可能となってきた。しかしながら、次世代シークエンサーの開発はゲノム解析に指向して進められており、外来遺伝子を含む本研究に適応するには、改めて条件を検討することが不可避である。現在、外来遺伝子を含む配列の解析ツールの構築に成功し、シークエンシング条件を設定中である。

  • 研究成果

    (2件)

すべて 2013 その他

すべて 雑誌論文 (1件) (うち査読あり 1件) 学会発表 (1件)

  • [雑誌論文] A hydrophobic amino acid cluster inserted into the C-terminus of a recycling cell surface receptor functions as an endosomal sorting signal2013

    • 著者名/発表者名
      Amano Y., Yoshino K., Kojima K., Takeshita T.
    • 雑誌名

      Biochem Biophys Res Commun

      巻: 441 ページ: 164-168

    • DOI

      10.1016/j.bbrc.2013.10.019

    • 査読あり
  • [学会発表] Hydrophobic amino acid cluster in the cytoplasmic tail of interleukin-2 receptor β chain acts as a sorting signal for lysosome

    • 著者名/発表者名
      天野勇治、小嶋克彦、吉野和寿、竹下敏一
    • 学会等名
      国際免疫学会
    • 発表場所
      ミラノ(イタリア)

URL: 

公開日: 2015-05-28  

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