| 研究概要 |
1年目の本年度は、HGFプロモーターの基礎研究を行った。固形がん細胞73細胞株を対象にHGFプロモーターpoly A領域の変異を検討したところ、Short polyA (< 25bp)の細胞株が7株、正常型のpolyAの細胞株は66株であった。73細胞株のHGFのmRNA発現をrealtime RT-PCRで解析し、HGFのmRNA高値の細胞株では29% (2株/7株)がShort polyAで、HGFのmRNA低値株では3％(2株/66株)であった。予想通りHGFのmRNA高値株は、Short polyAである頻度が有意に高いことが示された (p=0.04)。次にHGFタンパクの分泌量をELISAで検討したところ、Short polyAである H69細胞とIM95細胞が、他株と比べて1000倍以上HGFタンパクを分泌することを見出した。一方、Short polyAでもHGF低値の細胞株が存在したことから、HGFプロモーターのSNPを検討した。SNPは、-2142[C/A, rs11763015], -1965[G/T], -1903[G/A], -1652[C/T, rs3735520], -1268[G/C], -1215[-/C], -955[T/C], -578[T/C], +247[-/T, rs72525097]の9個のSNPを検討した。HGF高値のIM95細胞は、rs3735520がC/Aアレルであったのに対して、他の18株はCアレルであった。rs72525097についてもShort polyA株で頻度が高い傾向を認めた。HGFプロモーターの解析方法としては、自動ゲル解析装置の簡便スクリーニング系およびシークエンスの検証方法を確立した。研究は来年の臨床検体の検討に向けて予定通り順調に進行している。
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