ドメイン欠損型ＨＬＡ－Ｇ６アイソフォームと免疫制御受容体ＬＩＬＲ群の分子認識

2012 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 23770102
• 研究機関: 北海道大学
• 研究代表者: 黒木 喜美子 北海道大学, 薬学研究科(研究院), 助教 (90553313)
• キーワード: HLA-G6 / LILR / X線結晶構造解析 / 相互作用解析 / 電子顕微鏡 / NMR

研究概要

本申請では、ドメイン欠損型HLA-Gの中でも、特に機能的に重要な事が明らかなHLA-G6について、認識する免疫制御受容体分子LILRB2との相互作用解析・立体構造解析を行い、その分子基盤を明らかにすることを目指す。
今年度は、昨年度に引き続き安定なHLA-G6蛋白質を調製し、電子顕微鏡による立体構造解析を行った。HLA-G6の5000強個の電子顕微鏡像を30クラスに分類することを3回繰り返す作業を行っている。さらに像を選別、解析することによって、HLA-G6の全体像を明らかにすることを目指す。電子顕微鏡解析によりドメイン配向などが明らかになれば、既に結晶構造の明らかになっている通常型HLA-G1の精密な構造を当てはめることによって、受容体結合部位の予想も可能であると考えている。
HLA-G6受容体であるLILRB2との相互作用部位の同定に向けてはNMR解析およびX線結晶構造解析を同時に進めている。NMR解析では、LILRB2の主鎖ピークアライメントに向けて溶液条件の検討を行ってきたが、リガンドであるHLA-G6を加えることにより、タンパク質が凝集する傾向もみられ、さらなる条件検討が必要であると考えられる。
X線結晶構造解析については、HLA-G6単独での結晶化が困難であったため、受容体LILRB2と混合することによって複合体を形成させ、構造が安定化することを狙って結晶化スクリーニングを仕掛けている。今のところ、LILRB2単独の結晶であるか、良い反射を得られない結晶であるかのどちらかであり、今後さらなる条件検討を行う。

研究成果

• [雑誌論文] Structural and functional mosaic nature of MHC class I molecules in their peptide-free form. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kurimoto E, Kuroki K, Yamaguchi Y,Yagi-Utsumi M, Igaki T, Iguchi T, MaenakaK, Kato K.
  • 雑誌名: Mol Immunol. 巻: 55(3-4) ページ: 393-9
  • DOI: doi:10.1016/j.molimm.2013.03.014.
  • 査読あり
• [雑誌論文] The long-term immunosuppressive effects of disulfide-linked HLA-G dimer in mice with collagen-induced arthritis. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kuroki K, Hirose K, Okabe Y, Fukunaga Y, Takahashi A, Shiroishi M, Kajikawa M, Tabata S, Nakamura S, Takai T, Koyanagi S, Ohdo S, Maenaka K.
  • 雑誌名: Hum Immunol. 巻: 74(4) ページ: 433-8
  • DOI: doi:10.1016/j.humimm.2012.11.060.
  • 査読あり