|
大脳形成初期の神経幹細胞の性質の分子基盤の解明を目指し、研究代表者等が同定した大脳形成初期の神経幹細胞の維持に必須なNotch下流の新規因子Neproの発現制御機構の解析を進めた。前年度までに作製したNeproのゲノムDNA断片と蛍光タンパク質Venusをコードする遺伝子をつないだレポーターコンストラクトを電気穿孔法によりマウス脳組織で発現させたところ、Nepro遺伝子の上流に大脳神経幹細胞での発現を制御する領域が存在することが明らかになった。データベース解析により転写制御に関わる因子の結合配列モチーフを検索したところ、Nepro遺伝子の上流領域にNotchカスケード下流の転写制御因子の結合配列が複数存在することが明らかとなった。そこで、種間で保存された結合配列を含むDNA断片やその領域を欠損させたゲノムDNA断片にVenus遺伝子をつないだコンストラクトを作製し、電気穿孔法を用いてマウス脳組織で発現させてNeproの発現制御に必要十分な領域の同定を行っている。また、Nepro発現細胞をマウス生体脳内で可視化するため、Nepro遺伝子の発現制御下にVenusを発現するトランスジェニックマウスの作製を行った。今年度同定したNeproの発現制御領域を含むゲノムDNA断片にVenus遺伝子とSV40のイントロンとポリAをつないだコンストラクトを作製し、受精卵へのマイクロインジェクションを行い、得られたマウスについて現在解析を進めている。
|
