| 研究概要 |
チューリップにおける主要二次代謝産物であるチューリッポシド(Pos) A, Bは、チューリップ組織内のPosA変換酵素（TCEA)およびPosB変換酵素（TCEB)によってアグリコンのラクトン化体である抗菌活性物質チューリッパリン(Pa) A, Bへとそれぞれ変換される。これまでに、チューリップ組織からのTCEAの精製とTCEA酵素遺伝子のクローニングに成功しており、本酵素が分子内エステル転移によるラクトン形成反応を触媒する新しいタイプのカルボキシルエステラーゼであることを明らかにしている。今年度はTCEBの精製とTCEB酵素遺伝子のクローニング、機能解析を行い、TCEAとの相違を明らかにすることで、Pos→Pa酵素変換系の全容を解明することを目的とした。
開花期のチューリップ各組織の粗酵素中のTCE活性を測定したところ、特に葯において高いTCEB活性が検出された。酵素活性の詳細な局在解析の結果、葯でみられるTCEB活性の大半は葯に付着している花粉細胞に由来することが明らかとなった。そこで、花粉細胞から、各種カラムクロマトグラフィーによってTCEBの精製を行った。精製されたTCEBはPosAよりもPosBに対して顕著に高い酵素活性を示し、先に同定されたTCEAとは明らかに異なるものであることが分かった。精製酵素のN末端および内部アミノ酸配列解析の後、酵素遺伝子のクローニングを行った結果、TCEBはTCEAと同じくカルボキシルエステラーゼファミリーに属する酵素であることが明らかとなった。また、TCEB翻訳産物はN末端にプラスチド移行シグナルを有しており、成熟ポリペプチドはTCEAと同様にプラスチドに局在していることが分かった。
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