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・ERβとKLF5を介して血管新生を抑制するGS-1405最適化化合物の設計と評価
１）in silicoによるGS-1405最適化化合物の設計：これまでにERβの結晶構造に基づいたin silicoシミュレーションによってERβとGS-1405の結合様式の予測を行った結果、GS-1405はERβのGlu 305とArg 346と水素結合を形成していることが予測された。この結合がGS-1405のKLF5活性抑制に関与しているのかどうかを確かめるために305番目のグルタミン酸をアラニンに置換した変異型ERβを用いたルシフェラーゼアッセイを行った。その結果、GS-1405によるERβ依存的なKLF5の転写活性化能の抑制効果は変異体により軽減された。
２）GS-1405最適化化合物の評価：in silico予測を含むGS-1405最適化化合物のKLF5の転写活性化能に対する作用を検討した。その結果、いくつかの最適化化合物はKLF5の転写活性化能に対して強い抑制能を示すことが明らかになった。さらに、KLF5の下流因子であり血管新生に関与するPDGFAの転写への影響を検討した結果、これらの化合物により、PDGFAの転写が抑制されることが明らかになった。
・ERβのnon-genomic functionを抑制する化合物のスクリーニング
これまでの報告から、ERbはそのnon-genomic functionにより、HIF-1αによる VEGFの転写を制御している可能性が考えられる。そこで、HIF-1αの転写に対する作用を測定するためのHIF-1の応答配列を挿入したレポータープラスミドを構築し、低酸素により誘導されるHIF-1を介した転写の活性化が検出できることを確認した。さらに、この系を用いたスクリーニングを行った結果、８種類のHIF-1活性を抑制する化合物を単離することが出来た。
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