研究課題
本研究では、標的となるRNAに対して小さい構造修飾を行う新技術創製を目指している。この目的を達成するために、①標的への架橋反応、②光照射による架橋構造の一部脱離、という２段階反応にて標的核酸塩基へのピンポイント構造修飾を行うことを計画した。初年度においては、新しく設計した人工核酸塩基によって、最初の段階である架橋反応を高い収率で達成することが出来た。しかし、この架橋反応は酸性条件でしか速やかに進行せず、中性条件ではほとんど架橋反応が極めて遅いことが分かった。これは、将来的に本研究を細胞レベルにて展開する場合に大きな問題点となる。そこで、本年度においては、中性条件下での架橋反応を達成するため、架橋部位としてハロゲンを有する反応性人工核酸である4-(2-chloro-1-(2-nitrophenyl)ethoxy)pyrimidineを設計し、合成を行った。2'-デオキシウリジンを出発原料とし水酸基のアセチル保護後、ピリミジン４位酸素のスルホニル化、ニトロベンジル骨格の導入を行った。TBS保護していた水酸基を脱保護して塩素化した後、糖部水酸基の脱保護を行った。後は常法に従って5'水酸基のジメトキシトリチル化および3'水酸基のホスフィチル化を行いDNA自動合成装置に適用可能なアミダイトユニットを合成した。このアミダイトユニットは、切り出しが緩和な条件で行える固相担体を用いてDNA自動合成を行った。現在、精製条件等を検討中である。今後、この反応性核酸塩基を組み込んだオリゴヌクレオチドを用いて２段階反応による標的の化学修飾が起こるかHPLC、ポリアクリルアミドゲル電気泳動にて詳細に検討する予定である。
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Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids
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