| 研究課題/領域番号 |
23790297
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| 研究機関 | 広島大学 |
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研究代表者 |
久岡 一恵 広島大学, 医歯(薬)学総合研究科, 助教 (20393431)
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| 研究期間 (年度) |
2011-04-28 – 2013-03-31
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| キーワード | 抗うつ薬 / グリア |
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| 研究概要 |
近年、抗うつ薬が脳の可塑性に作用することが知られ、治療効果との関連が注目されている。本研究は、抗うつ薬の新たな標的分子として、グリア細胞に存在する線維芽細胞増殖因子（Fibroblast growth factor；FGF）受容体に着目し、抗うつ薬によるFGF受容体活性化機構が、いかにして抗うつ薬の治療効果に寄与するかを明らかとすることを目的としている。今年度は以下の検討を行った。１、グリア細胞での抗うつ薬（アミトリプチリン）処置によるFGF受容体活性化において、内因性FGF受容体リガンドの遊離を介する経路を明らかとした。さらに、FGF受容体リガンドに特異的な中和抗体を複数用いて、アミトリプチリンの作用に関連するサブタイプを探索したところ、FGF-2の関与が確認できた。２、アミトリプチリン処置によるFGF受容体活性化機構を明らかにするために、FGF受容体リガンドの遊離に関連する分子群（マトリックスメタロプロテアーゼ、Na+/K+-ATPaseなど）の阻害薬を用いて検討したところ、マトリックスメタロプロテアーゼの関与が推測された。３、FGF受容体の下流の細胞内情報伝達分子（FRS2、ERK、CREBなど）のリン酸化（活性化）をウエスタン法で定量し、アミトリプチリンによるFGF受容体活性化後にFRS2→ERK→CREBカスケードが活性化されグリア細胞由来神経栄養因子(GDNF)の発現が誘導されることを明らかとした。４、研究協力者らの支援により研究参加に関して十分な説明を行った上で文書による同意を得られたうつ病患者の血液サンプルを数例収集した（現在継続中）。健常者の血液サンプル（血清、血漿、全血）を用いてFGF受容体リガンド測定の基礎検討を行い、血液サンプル中のFGF-2の測定が可能となった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
グリア細胞(ヒト正常アストロサイト、ラットグリア由来C6細胞)において、抗うつ薬によるFGF受容体の活性化がGDNFの産生に重要であることを明らかとし、FGF受容体の活性化にはマトリックスメタロプロテアーゼによるFGF-2の遊離が関与していることを論文にまとめて投稿し、査読の結果、掲載された(Hisaoka K et al., J Biol Chem 286(24): 21118-21128, 2011)。 また、第119回日本薬理学会近畿部会において、ラット初代培養アストロサイトにおいて抗うつ薬がFGF-2を誘導すること、第120回日本薬理学会近畿部会において、抗うつ薬によるGDNF産生機構におけるマトリックスメタロプロテアーゼの関与を発表した。 したがって、平成23年度に計画した研究内容は、ほぼ８割方検討できたことから、おおむね順調に研究は進展していると判断した。
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| 今後の研究の推進方策 |
今年度の研究結果から、グリア細胞において、抗うつ薬によるFGF受容体の活性化にはマトリックスメタロプロテアーゼが重要な役割を果たす可能性が示唆された。次年度は、まず初めにグリア細胞に発現するマトリックスメタロプロテアーゼのサブタイプをRT-PCR法で確認する。その後、マトリックスメタロプロテアーゼのサブタイプに選択的な阻害薬およびsiRNAを用いて、抗うつ薬の作用に関与するマトリックスメタロプロテアーゼのサブタイプを同定し、それらの関連を検討する予定である。さらに、抗うつ薬によるマトリックスメタロプロテアーゼの活性化をザイモグラフィーで測定し、遊離をELISAで測定する。マトリックスメタロプロテアーゼの活性化に関与する分子群（Gタンパク質、Srcチロシンキナーゼなど）の阻害薬を用いて、抗うつ薬によるマトリックスメタロプロテアーゼの活性化機構を探索する。 一方で、グリア細胞にストレスホルモン（グルココルチコイド）を慢性処置することで、うつ病モデルグリア細胞を作成する。うつ病モデルグリア細胞におけるFGF受容体とFGF受容体リガンド量をウエスタン法およびELISA法により定量し、正常グリア細胞と比較する。さらに、抗うつ薬処置によりFGF受容体機能におよぼす作用について、正常グリア細胞とうつ病モデルグリア細胞で比較検討を行う予定である。 研究協力者らの支援により、うつ病患者の血液サンプルは次年度も継続して行う予定である。例数がある程度たまった段階で、血液中のFGF-2を測定する。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
グリア細胞培養用の試薬、阻害薬、siRNAなどの物品や血液中のFGF-2測定用ELISAキットに研究費全体の９割以上を使用する予定である。
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