研究課題
C型ボツリヌス毒素産生菌は、家畜に強力な致死作用を引き起こすため、畜産分野では脅威となっている。C型毒素遺伝子は、バクテリオファージ（ファージ）により伝播される（ファージ変換）。以前に、C型毒素変換ファージc-stの全ゲノム解析を行った。しかしながら、その大部分の遺伝子情報は未知であった。毒素遺伝子のファージ変換防止には、ファージ遺伝情報の解明が必要である。本研究では、ファージコアゲノム領域の特定を行うことを目的とした。今年度は、１）c-stを構成する構造タンパク質をコードする遺伝子群の特定、２）同種ファージC型毒素変換ファージc-468との比較ゲノム解析を行い、ファージの生命維持に必要なコアゲノムの推定を行った。1）c-stの構造タンパク質をコードする遺伝子群の特定…CsCl密度勾配遠心法によりc-stの粒子タンパク質を精製し、N末端アミノ酸分析と質量分析を用いて解析したところ、計10個のOpen Reading Frame (ORF)が同定された。これらのORFは全てc-stゲノム上の99-168 kbp領域に存在することが示唆された。2）c-468との比較ゲノム解析…今年度は、昨年度に続き比較ゲノム解析に使用するc-468 ゲノムの全塩基配列の決定を行った。しかしながら、c-468には異なるサイズのゲノム分子が存在したため、新たにゲノム配列を決定する必要があると考えられた。従って、全ゲノム配列の決定は完全ではない。現在、C型有毒株C468の純培養を行い、得られた菌DNAを使用して宿主菌体内に存在するファージゲノム配列決定を次世代シークエンサーにより行っている。今年度の結果から、C型毒素変換ファージの構造タンパク質をコードする遺伝子群を明らかにした。今後、解析を進めファージのコアゲノムを特定し、毒素遺伝子の伝播機構（ファージ変換）の解明を行いたい。
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Acta Med. Okayama
巻: 67(1) ページ: 9-18
Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A.
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10.1073/pnas.1121546109
http://www.miyazaki-u.ac.jp/ir/?p=92
