| 研究課題/領域番号 |
23790493
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
南保 明日香 北海道大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (60359487)
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| キーワード | エボラウイルス / 侵入 / エンドサイトーシス |
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| 研究概要 |
エボラウイルス感染は極めて高い致死率を伴う重篤なエボラ出血熱を惹起することから、早急に制圧しなくてはならない感染症の一つであるが、現時点においてエボラウイルス感染に対する有効な治療法は実用化されていない。エボラウイルスに対する抗ウイルス薬の開発において、ウイルス侵入過程は特に魅力的な標的の一つであることから、侵入機構の分子レベルでの解明は非常に意義深いと考えられるが、エボラウイルスの侵入における分子機構の詳細についてはまだ不明な点が多い。本研究課題においては、siRNAライブラリを用いたハイスループットスクリーニング系を確立し、この系を用いてエボラウイルスの侵入過程において重要な役割を果たす宿主因子の網羅的同定を行うことを最終目的としている。そこで第一に申請者の確立した、可視化系を基盤とし、ハイコンテンツイメージングシステムを用いたハイスループットスクリーニング系の確立を試みた。申請者の研究成果より、エボラウイルス侵入は複数の過程から構成されることが明らかになった。各過程における効率について以下に示す方法で定量化を試みた。1.エボラウイルス粒子の細胞表面への吸着については、細胞表面において検出されるウイルス粒子由来の蛍光シグナルを定量する。2.マクロピノサイトーシスを介したウイルス粒子の細胞への取込み、および、3.取り込まれたウイルス粒子のエンドソームへの輸送については、マクロピノサイトーシスによって生成されるエンドソーム(マクロピノソーム)および後期エンドソーム特異的マーカーであるSNX5およびRab7にeGFPを融合したタンパク質をそれぞれVero-E6細胞に発現させ、ウイルス粒子との共局在の効率を定量化する。4.ウイルス粒子のエンベロープとエンドソーム膜との融合については、Rab7陽性エンドソ―ムにおける蛍光シグナルの強度およびその挙動を調べることで定量化した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
平成24年度において、申請者が開発した、エボラウイルス粒子の細胞への取込みを直接的に解析する生細胞イメージング系を基盤としたスクリーニング系の確立および最適化は完了した。また、平成24年度は米国および国内の研究協力者との打ち合わせを行い、共同研究における連携も問題なく進行している。現在、当該スクリーニング系を用いたsiRNAライブラリを用いたスクリーニングを行っている段階であることから、判定を（２）とした。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後の研究の推進方策を以下に示す。
現在、本学創薬科学研究教育センターに設置されたハイコンテンツイメージングシステムを用いて、siRNAライブラリを用いたハイスループットスクリーニングを試みている最中である。スクリーニングの結果、得られた各種候補宿主因子についてさらに以下に示す解析を進める。
第一に、これらの宿主因子が実際にエボラウイルス侵入に関与するか否かを、BSL4施設において野生型エボラウイルスを用いた感染系を用いて検証する。また、エボラウイルス侵入における各種宿主因子の役割についてウイルス因子との相互作用を中心に解析を行い、その分子機構の解明を試みる。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
平成25年度に、siRNAスクリーニングを行い、日本ウイルス学会学術大会において発表する予定であったが、スクリーニングが平成25年度内に終了できない可能性が高くなったため、スクリーニングおよび学術大会での発表を次年度に行うこととし、未使用額はその経費に充てることにした。
平成26年度において、siRNAスクリーニングおよび学術大会での発表を行うため、未使用額はその経費に充てる予定である。
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