| 研究課題/領域番号 |
23790551
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| 研究機関 | 独立行政法人理化学研究所 |
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研究代表者 |
竹内 新 独立行政法人理化学研究所, 免疫シグナル研究グループ, 研究員 (00360579)
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| 研究期間 (年度) |
2011-04-28 – 2014-03-31
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| キーワード | 免疫学 / 細胞接着因子 / 粘膜免疫 |
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| 研究概要 |
これまでにCRTAM陽性のCD4+T細胞は腸管の粘膜固有層に多く存在していることを確認している。組織の免疫染色から、CRTAMのリガンドであるNecl2が腸管内に広く発現していることを新たに確認した。またNecl2欠損マウスの粘膜固有層においては、明らかにCRTAM陽性CD4+T細胞数の減少が認められ、粘膜固有層へのCRTAM陽性CD4+T細胞の集積にはCRTAM-Necl2相互作用が重要であることを改めて確認することが出来た。更に大腸炎誘導モデルの系において、CRTAM欠損マウス由来の細胞を移入した場合は体重減少が野生型と比べて軽微であることを再度確認した。実際に大腸の組織を確認したところ、野生型の細胞を移入した場合と比べ、炎症に伴う組織の肥厚はかなり軽い症状であった。また、浸潤しているCD4+T細胞の数も欠損マウス由来の細胞を移入した場合では明らかな減少が認められた。野生型と欠損マウス由来の細胞を競合させて大腸炎を誘導した系でも同様の結果が得られており、大腸炎が誘導される際にもCRTAM-Necl2の相互作用によるCD4+T細胞の集積が重要なポイントとなっていることが明らかとなった。しかし大腸に浸潤している細胞のINFg, IL-17産生能等を調べたところ、共に野生型と同等のレベルを維持していたことから、CRTAM欠損マウス由来の細胞でも機能的には正常である可能性が示唆された。また、vitroの系でCRTAM欠損マウス由来の細胞に分化誘導をかけても野生型と同等の結果を示し、CRTAMの発現と相関関係は認められなかった。この結果はCRTAMの発現自体も細胞の分化に影響することを示唆していた以前の知見とは異なるものであり、今後は細胞分化への関与について、より詳細に解析していく必要がある。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
大腸炎誘導モデルについてはかなりの進展があり、リガンド発現部位の確認を始め、組織の状態確認や浸潤している細胞についても解析することが出来た。トランスジェニックマウスの作製も、現在個体の誕生を確認しており、早々に解析が可能となる予定である。また、次年度以降に予定していたブロッキング抗体の作製も進めており、有望なクローンを絞りつつある。しかし、CRTAMノックインマウスの作製は複数のコンストラクトで試みているものの、目的のESクローンが得られておらず、予定よりやや遅れている。
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| 今後の研究の推進方策 |
Necl2/Rag二重欠損マウスを用いた大腸炎誘導モデルの検討を行う。この系で大腸炎の誘導が抑制されれば、CRTAM-Necl2相互作用の寄与を確実に示すことが出来る。トランスジェニックマウスはCRTAM全長のものと、細胞外ドメインのみを発現する二種類を作製した。これらのマウスを解析し、CRTAMが細胞分化へどの様に関与するのか、細胞内ドメインの働きなど、個体及び分子レベルでの解明を試みる。単離したブロッキング抗体は実際に生体内で有用なものかどうかを確認するため、大量精製を行い、大腸炎の系などを用いてその効果を確認する。CRTAMノックインマウスの作製も引き続き行い、in vivoイメージングによる細胞動態の解析を目指す。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
H23年度未使用分については、CRTAMノックインマウスを作製する際（ESクローンの単離、胚操作、胚移植、その後のマウスの飼育及び戻し交配など）に使用する予定であった。しかし現在までにクローンの単離に至っておらず、その結果として生じたものである。この未使用分については、H24年度も引き続き予定しているCRTAMノックインマウスの作製に使用する予定である。H24年度研究費については主にマウスの維持、購入、ex vivo解析に必要な道具や試薬、細胞培養の試薬、プラスチック製品、抗体試薬などの購入に充てる予定である。
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