診断マーカー感度向上に向けた高親和性抗体迅速単離法の開発

2012 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 23790617
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 病態検査学
• 研究機関: 富山大学
• 研究代表者: 小澤 龍彦 富山大学, 大学院・医学薬学研究部(医学), 助教 (10432105)
• 研究期間 (年度): 2011 – 2012
• キーワード: 臨床検査医学 / 高親和性抗体 / ウサギモノクローナル抗体

研究概要

抗原特異的ウサギモノクローナル抗体(RaMoAbs)は親和性及び特異性が非常に高く特異的抗原の検出に非常に有用であることから、迅速かつ網羅的なRaMoAbsの作製法が望まれている。今回我々は、抗原特異的RaMoAbsの迅速な作製法の開発に取り組んだ。その結果、抗原で免疫したウサギ由来末梢血リンパ球を調整してから7日以内に親和性の高い抗原特異的RaMoAbsを網羅的に得る事に成功した。我々の確立した迅速かつ網羅的なRaMoAbsの新しい作製法は、研究用途のみならず、臨床用途にも寄与することが期待される。

研究成果

• [雑誌論文] Reduced Level of the BCL11B Protein Is Associated with Adult T-Cell Leukemia/Lymphoma (2013)
  • 著者名/発表者名: Kurosawa N, Fujimoto R, Ozawa T, Itoyama T, Sadamori N, Isobe M
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 8 ページ: e55147
  • DOI: DOI:10.1371/journal.pone.0055147
  • 査読あり
• [雑誌論文] A novel rabbit immunospot array assay on a chip allows for the rapid generation of rabbit monoclonal antibodies with high affinity (2012)
  • 著者名/発表者名: Ozawa T, Piao X, Kobayashi E, Zhou Y, Sakurai H, Andoh T, Jin A, Kishi H, Muraguchi A
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 7 ページ: e52383
  • DOI: DOI:10.1371/journal.pone.0052383
  • 査読あり
• [雑誌論文] The binding affinity of a soluble TCR-Fc fusion protein is significantly improved by crosslinkage with an anti-Cbeta antibody (2012)
  • 著者名/発表者名: Ozawa T, Horii M, Kobayashi E, Jin A, Kishi H, Muraguchi A
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun 巻: 422 ページ: 245-249.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Unbiased Analysis of TCRalpha/beta Chains at the Single-Cell Level in Human CD8(+) T-Cell Subsets. (2012)
  • 著者名/発表者名: Sun X, Saito M, Sato Y, Chikata T, Naruto T, Ozawa T, Kobayashi E, Kishi H, Muraguchi A, Takiguchi M
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 7 ページ: e40386
  • DOI: DOI:10.1371/journal.pone.0040386
  • 査読あり
• [雑誌論文] HELIOS-BCL11B fusion gene involvement in a t(2;14)(q34;q32) in an adult T-cell leukemia patient (2012)
  • 著者名/発表者名: Fujimoto R, Ozawa T, Itoyama T, Sadamori N, Kurosawa N, Isobe M
  • 雑誌名: Cancer Genet 巻: 205 ページ: 356-364
  • 査読あり
• [雑誌論文] Characterization of a fully human monoclonal antibody against extracellular domain of matrix protein 2 of influenza A virus. (2011)
  • 著者名/発表者名: Ozawa T, Jin A, Tajiri K, Takemoto M, Okuda T, Shiraki K, Kishi H, Muraguchi A
  • 雑誌名: Antiviral Res 巻: 91 ページ: 283-287.
  • 査読あり
• [学会発表] Rabbit ISAAC (rabbit immunospot array assay on a chip) allows for the rapid generation of rabbit monoclonal antibodies with high affinity (2013)
  • 著者名/発表者名: Piao X, Muraguchi A, Hamana H, Ozawa T, Kobayashi E, Jin A, Kishi H
  • 学会等名: Keystone Symposia (Antibodies as Drugs)
  • 発表場所: Vancouver, British Columbia, Canada
  • 年月日: 20130127-31
• [学会発表] A novel rabbit immunospot array assay on a chip allows for the rapid generation of rabbit monoclonal antibodies (2012)
  • 著者名/発表者名: Ozawa T, Piao X, Kobayashi E, Zhou Y, Sakurai H, Andoh T, Jin A, Kishi H.Muraguchi A
  • 学会等名: 第34回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 福岡
  • 年月日: 20121211-14
• [学会発表] The binding affinity of a soluble TCR-Fc fusion protein is significantly improved by crosslinkage with an anti-Cβ antibody. (2012)
  • 著者名/発表者名: Ozawa T, Kobayashi E, Jin A, Kishi H, Muraguchi A
  • 学会等名: 第41回日本免疫学会総会・学術集会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 20121205-07
• [学会発表] Rapid generation of super-antibodies using rabbit ISAAC (2012)
  • 著者名/発表者名: Piao X, Ozawa T, Kobayashi E, Kishi H, Muraguchi A.
  • 学会等名: 第41回日本免疫学会総会・学術集会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 20121205-07
• [学会発表] Cloning of human antigen-specific TCRs can confer the candidates for cancer gene therapy (2012)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi E, Kishi H, Hamana H, Ozawa T, Nakagawa H, Jin A, Muraguchi A.
  • 学会等名: 第41回日本免疫学会総会・学術集会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 20121205-07
• [学会発表] Detection of antigen-stimulated cytokine-secretion in human T-cells at single cell levels on a live cell chip. (2012)
  • 著者名/発表者名: Kishi H, Jin A, Kobayashi E, Ozawa T, Hamana H, Muraguchi A.
  • 学会等名: Detection of antigen-stimulated cytokine-secretion in human T-cells at single cell levels on a live cell chip.
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 20121205-07
• [学会発表] Comparison of TCR repertoires in EBV-specific T cells detected by three different staining methods. (2012)
  • 著者名/発表者名: Hamana H, Kobayashi E, Kishi H, Ozawa T, Jin A, Muraguchi A
  • 学会等名: 第41回日本免疫学会総会・学術集会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 20121205-07
• [学会発表] Analysis of cellular responses at singel cell levels with a hybrid magnetic microwell array chip (2012)
  • 著者名/発表者名: Kishi H, Obata T, Takami S, Kazui M, Ozawa T, Ogawa A, Muraguchi A
  • 学会等名: International Joint Symposium on Single-Cell Analysis
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 20121127-28
• [学会発表] Cloning of human antigen-specific TCRs can confer the candidates for cancer gene therapy (2012)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi E, Mizukoshi E, Kishi H, Hamana H, Nagai T, Ozawa T, Nakagawa H, Jin A, Kaneko S, Muraguchi A
  • 学会等名: SITC 27th Annual Meeting
  • 発表場所: North Bethesda, MD, USA
  • 年月日: 20121026-28
• [学会発表] がんのTCR遺伝子治療にむけた候補TCR遺伝子の迅速クローニング法 (2012)
  • 著者名/発表者名: 岸裕幸, 小林栄治, 水腰英四郎, 小澤龍彦, 金子周一, 村口篤
  • 学会等名: 第71回日本癌学会学術集会
  • 発表場所: 札幌
  • 年月日: 20120919-21
• [学会発表] A high-throughput method for generating rabbit monoclonal antibodies by immunospot array assay on a chip technology (2011)
  • 著者名/発表者名: Ozawa T, Piao X, Kobayashi E, Kishi H, Muraguchi A.
  • 学会等名: 第33回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 20111206-09
• [学会発表] 可溶化TCRの作製と機能解析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 小澤龍彦, 小林栄治, 岸裕幸, 村口篤
  • 学会等名: 第40回日本免疫学会総会・学術集会
  • 発表場所: 千葉
  • 年月日: 20111127-29
• [学会発表] 単一細胞解析に基づく迅速な抗原特異的T細胞受容体クローニングシステム. (2011)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi E, Hamana H, Nagai T, Ozawa T, Kishi H, Muraguchi A.
  • 学会等名: 第40回日本免疫学会総会・学術集会
  • 発表場所: 千葉
  • 年月日: 20111127-29
• [学会発表] 迅速なTCR cDNAクローニングシステムを用いたEBV特異的単一T細胞のTCRα/βレパトア解析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 浜名洋, 小林栄治, 長井輝美, 小澤龍彦, 岸裕幸, 村口篤
  • 学会等名: 第40回日本免疫学会総会・学術集会
  • 発表場所: 千葉
  • 年月日: 20111127-29
• [学会発表] ISAAC法を用いた迅速かつハイスループットなウサギモノクローナル抗体作成法の開発 (2011)
  • 著者名/発表者名: 朴秀虹, 小澤龍彦, 小林栄治, 岸裕幸, 村口篤.
  • 学会等名: 第40回日本免疫学会総会・学術集会
  • 発表場所: 千葉
  • 年月日: 20111127-29
• [学会発表] 細胞チップを用いた抗原特異的サイトカイン分泌T細胞の単一細胞レベルでの検出 (2011)
  • 著者名/発表者名: Kishi H, Kobayashi E, Ozawa T, Hamana H, Nagai T, Tajiri K, Muraguchi A
  • 学会等名: 第40回日本免疫学会総会・学術集会
  • 発表場所: 千葉
  • 年月日: 20111127-29
• [学会発表] The novel method to detect single antibody-secreting B-cells and single cytokine-secreting T-cells using a cell-microarray chip (2011)
  • 著者名/発表者名: Ozawa T, Kobayashi E, Tajiri K, Jin A, Kishi H, Muraguchi A
  • 学会等名: Cold Spring Harbor Meeting, Single cell analysis
  • 発表場所: New York, USA
  • 年月日: 20110722-24
• [学会発表] Single T cell analysis system for rapid cloning and functional evaluation of antigen-specific T cell receptors Cold Spring Harbor Conferences Asia (2011)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi E, Hamana H, Nagai T, Horii M, Ozawa T, Kishi H, Muraguchi A.
  • 発表場所: Suzhou, China.
  • 年月日: 20110524-28
• [図書] Screening of antigen-specific antibody-secreting cells (2012)
  • 著者名/発表者名: Kishi H, Jin A, Ozawa T, Tajiri K, Obata T, Muraguchi A
  • 総ページ数: 141-150
  • 出版者: Springer、Methods Mol Biol
• [図書] ンパ球アレイ法を用いた抗体医薬の開発. 細胞 (2011)
  • 著者名/発表者名: 小澤龍彦, 田尻和人, 岸裕幸, 村口篤
  • 総ページ数: 20-23
  • 出版者: ニューサイエンス社
• [図書] シングル細胞チップと抗体医薬への応用 (2011)
  • 著者名/発表者名: 小澤龍彦, 岸裕幸, 村口篤
  • 総ページ数: 50-57.
  • 出版者: シーエムシー出版、ナノ融合による先進バイオデバイス
• [図書] 新しい抗体スクリーニング法. (2011)
  • 著者名/発表者名: 小澤龍彦, 岸裕幸, 村口篤
  • 総ページ数: 29-37
  • 出版者: 医薬の門社、感染・炎症・免疫
• [産業財産権] 抗原特異的ウサギ抗体産生細胞の迅速な特定方法およびその利用 (2012)
  • 発明者名: 村口篤, 岸裕幸, 小澤龍彦
  • 権利者名: 村口篤, 岸裕幸, 小澤龍彦
  • 産業財産権番号: 特願2012-221822
  • 出願年月日: 2012-10-04