次年度の研究費の使用計画 |
<上記腹膜播種関与候補miRNA群の機能解析(In vivoでの腹膜播種関与の確認)> 上記候補miRNAのそれぞれのpre-miRs, anti-miRs, Negative Control precursor and inhibitor miRNAs(Ambion)を購入し、これをMKN-7, MKN-45, KATO-IIIにlipofectamine 2000を用いてtransfectionしたoverexpression, knochdown, negative controlとなる細胞株を作成,ヌードマウスに腹腔内注入し、腹膜播種の形成への影響を確認する。<5)で腹膜播種形成に関与することが証明されたmiRNAに調節されるmRNAの検索> 上記5)で腹膜播種形成に関与することが確認されたmiRNAをstable knckdownした細胞株とknockdownしていない細胞株(control)からcDNAを作成し、gene tipを用いたmicroarrayを施行。上記5)で確認されたmiRNAに調節されるmRNA候補群を確認する。<上記腹膜播種関連遺伝子(mRNA)の機能解析:In vitro>・cell proliferation assay ・colony formation assay ・migration assay ・invasive assay ・anoikis assay など<上記腹膜播種関連遺伝子の機能解析(mRNA):In vivo> 上記候補遺伝子をMKN-7, MKN-45, KATO-IIIを用いてstable knockdownした細胞株を作成する。上記のknockdown細胞株と対象群をそれぞれヌードマウスに腹腔内注入し、腹膜播種の形成への影響を確認する。
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