研究課題
血液型不適合移植では、ドナー臓器の血液型抗原とレシピエント血中の抗血液型抗体との抗体抗原反応を抑制するために、血漿交換、B細胞系免疫抑制剤との併用療法が行われているが、通常の腎移植よりも免疫抑制が強力なために顕在化する感染症および移植後の長期成績の若干の低下が問題となる。平成23年度、ファージディスプレイ法によりA/B型抗原に結合する7残基のペプチド配列（RPRNPNK）を同定し、ABO抗原標的ペプチド（Blood group antigen targeting peptide、BATP）と名付けた。BATPは、赤血球上および腎組織上のABO抗原を減弱化し、抗原抗体反応を抑制することが示された。これらの研究成果を第44回臨床腎移植学会、第99回日本泌尿器科学会、第84回日本生化学会など学会に発表し、臨床腎移植学会誌、腎移植症例集2011に発表した。本年度（平成24年度）は、BATPの生体外還流によるヒト腎血管における血栓予防効果、BATPの腎血管内皮細胞における結合安定性および細胞毒性の検証を行った。BATPの細胞毒性を検討するため、ヒト腎血管内皮細胞の初代培養細胞に対する細胞毒性を検討した結果、BATPによる腎血管内皮細胞への細胞毒性は、ほとんど認められなかった。また腎細胞癌患者から摘出した腎臓の正常部分を用いたABO不適合血液の再灌流モデルにより、BATP灌流による腎糸球体内の血栓形成阻害効果を検討した結果、BATP灌流により、腎糸球体毛細血管において 抗血液型抗体IgGおよびIgMの沈着が効果的に抑制されたことから、血液型抗原をマスクすることで血液型抗原と抗体の抗原抗体反応を抑制することが明らかとなった。これらの成果は、第48回日本移植学会、第28回欧州泌尿器科学会、Transplantation 95, 418-425 2013に発表した。
3: やや遅れている
本年度の計画のひとつであるヒト腎血管へのペプチド灌流によるペプチドの血栓予防効果の検証についておおむね順当に進呈しており、その成果を第48回日本移植学会、第28回欧州泌尿器科学会、Transplantation 95, 418-425 2013に発表した。もう一つの計画である。血流下における腎血管内皮細胞への血栓予防ペプチドのマスク効果の検討血流を模倣したシェアストレス下で培養したヒト腎血管由来の初代培養血管内皮細胞に蛍光ラベルしたペプチドを添加し、細胞表面の血液型糖鎖抗原のマスク効果について経時的に解析し、ペプチドの安定性について検討する試験について、A型およびB型血液型抗原を発現するヒト腎血管由来初代培養血管内皮細胞が入手できなかったため、現在、遺伝子導入によりA型およびB型血液型抗原を発現するヒト腎血管由来初代培養血管内皮細胞を作製しているため、やや計画より遅れていると判断する。
平成24年度の試験研究の一部である血流下における腎血管内皮細胞への血栓予防ペプチドのマスク効果の検討について引き続き研究を進めるとともに、平成25年度の計画である移植腎血管内皮上の血液型糖鎖抗原提示分子の同定および提示分子結合ペプチドの同定について平行して研究を行う。1.血流を模倣したシェアストレス下で培養したヒト腎血管由来の初代培養血管内皮細胞に蛍光ラベルしたペプチドを添加し、細胞表面の血液型糖鎖抗原のマスク効果について経時的に解析し、ペプチドの安定性について検討する。遺伝子導入によりA型およびB型血液型抗原を発現するヒト腎血管由来初代培養血管内皮細胞を作製して試験を行う。2.移植腎の針生検標本あるいは、ヒト腎全摘標本の血液型糖鎖抗原発現部分をレーザーマイクロダイセクションで切り出し、その糖鎖構造および血液型糖鎖抗原提示分子をMALDI-TOF Mass、LC-SSI-MS を用いて同定する。上記組織の入手が困難な場合、ヒト腎血管由来初代培養血管内皮細胞の膜タンパク質の糖鎖構造を解析し、血液型糖鎖抗原提示分子の同定を試みる。さらに血液型糖鎖抗原提示分子に特異的に結合するペプチド配列をファージディスプレイ法にて同定する。
該当なし
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Transplantation
巻: 95(3) ページ: 418-425
10.1097/TP.0b013e3182795b9c.
http://www.med.hirosaki-u.ac.jp/~uro/
