線維柱帯の圧感受性を規定する細胞骨格および細胞接着の変化に関わる因子の網羅的研究

2013 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 23791994
• 研究機関: 熊本大学
• 研究代表者: 井上 俊洋 熊本大学, 医学部附属病院, 講師 (00317025)
• キーワード: 緑内障 / 酸化ストレス / 線維柱帯 / 細胞骨格

研究概要

圧感受性と細胞骨格の関与を調べるため、われわれは緑内障患者眼の房水と線維柱帯で増加している酸化ストレスと細胞死に着目し、ROCK阻害薬が線維柱帯細胞において酸化ストレスに与える影響について検討した。前年度までの研究によって、カニクイザル培養線維柱帯細胞をROCK阻害薬（Y-27632、25μM）で30分処理したあとmRNAを回収し、マイクロアレイを用いて12613遺伝子を網羅的に解析したところ、抗酸化機能関連の5つの遺伝子の発現が上昇しており、さらにY-27632による前処理によってカニクイザル線維柱帯細胞の酸化ストレスによる細胞死が減少することがWST-8 assayによって示唆されていた。この現象をさらに確かめるために、われわれは抗活性化caspase-3抗体を用いて免疫染色を行った。800μMの過酸化水素水処理によって活性化caspase-3陽性細胞は著明に増加したが、その影響は25μMのy-27632による前処理によって抑制されることが分かった。さらに同濃度のY-27632による刺激によって、抗酸化タンパクであるcatalase遺伝子の発現が上昇することがRT-PCRによって確かめられた。また蛍光プローブを用いて活性酸素の発現を調べたところ、過酸化水素水によって誘導される活性酸素はY-27632で抑制されていた。一方で過酸化水素水による酸化ストレスによって線維柱帯細胞のアクチン細胞骨格が脱重合化されることも免疫染色によって確認された。これらの結果から、ROCK阻害薬は細胞内における抗酸化作用物質の発現を誘導し、酸化ストレスによる細胞死を抑制することが示された。そのメカニズムにおいてはアクチン細胞骨格の変化が関与する可能性が示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] Epithelial mesenchymal transition-like phenomenon in trabecular meshwork cells (2014)
  • 著者名/発表者名: Takahashi E, Inoue T, Fujimoto T, Kojima S, Tanihara H
  • 雑誌名: Experimental Eye Research 巻: 118 ページ: 72-79
  • DOI: 10.1016/j.exer.2013.11.014
  • 査読あり
• [雑誌論文] Monocyte chemotactic protein-1 level in the aqueous humour as a prognostic factor for the outcome of trabeculectomy (2014)
  • 著者名/発表者名: Inoue T, Kawaji T, Tanihara H
  • 雑誌名: Clinical and Experimental Ophthalmology 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • 査読あり
• [雑誌論文] Trabeculectomy for open-angle glaucoma in phakic eyes vs in pseudophakic eyes after phacoemulsification: a prospective clinical cohort study (2014)
  • 著者名/発表者名: Takihara Y, Inatani M, Ogata-Iwao M, Kawai M, Inoue T, Iwao K, Tanihara H
  • 雑誌名: JAMA Ophthalmology 巻: 132 ページ: 69-76
  • DOI: 10.1001/jamaophthalmol.2013.5605.
  • 査読あり
• [雑誌論文] A growth-promoting signaling component cyclin D1 in neural stem cells has anti-astrogliogenic function to execute self-renewal (2014)
  • 著者名/発表者名: Bizen N, Inoue T, Shimizu T, Tabu K, Kagawa T, Taga T.
  • 雑誌名: Stem Cells 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • DOI: 10.1002/stem.1613.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Oxidative stress response signaling pathways in trabecular meshwork cells and their effects on cell viability (2013)
  • 著者名/発表者名: Awai-Kasaoka N, Inoue T, Kameda T, Fujimoto T, Inoue-Mochita M, Tanihara H
  • 雑誌名: Molecular Vision 巻: 19 ページ: 1332-1340
  • 査読あり
• [雑誌論文] The effect of Rho-associated kinase inhibition on the ocular penetration of timolol maleate (2013)
  • 著者名/発表者名: Arnold JJ, Hansen MS, Gorman GS, Inoue T, Rao V, Spellen S, Hunsinger RN, Chapleau CA, Pozzo-Miller L, Stamer WD, Challa P
  • 雑誌名: Investigative Ophthalmology and Visual Science 巻: 54 ページ: 1118-1126
  • DOI: 10.1167/iovs.12-10583
  • 査読あり
• [雑誌論文] Rho-associated kinase inhibitors: a novel glaucoma therapy (2013)
  • 著者名/発表者名: Inoue T, Tanihara H
  • 雑誌名: Progress in Retinal and Eye Research 巻: 37 ページ: 1-12
  • DOI: 10.1016/j.preteyeres.2013.05.002
  • 査読あり
• [雑誌論文] Phase 2 randomized clinical study of a Rho kinase inhibitor, K-115, in primary open-angle glaucoma and ocular hypertension (2013)
  • 著者名/発表者名: Tanihara H, Inoue T, Yamamoto T, Kuwayama Y, Abe H, Araie M; K-115 Clinical Study Group
  • 雑誌名: American Journal of Ophthalmology 巻: 156 ページ: 731-736
  • DOI: 10.1016/j.ajo.2013.05.016.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Elevated levels of multiple biomarkers of Alzheimer's disease in the aqueous humor of eyes with open-angle glaucoma (2013)
  • 著者名/発表者名: Inoue T, Kawaji T, Tanihara H
  • 雑誌名: Investigative Ophthalmology and Visual Science 巻: 54 ページ: 5353-5358
  • DOI: 10.1167/iovs.13-12245.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Risk factors for choroidal detachment after trabeculectomy with mitomycin C (2013)
  • 著者名/発表者名: Haga A, Inatani M, Shobayashi K, Kojima S, Inoue T, Tanihara H
  • 雑誌名: Clinical Ophthalmology 巻: 7 ページ: 1417-1421
  • DOI: 10.2147/OPTH.S46375.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Prognostic factors in trabeculectomy with mitomycin C having history of previous glaucoma surgery (2013)
  • 著者名/発表者名: Awai-Kasaoka N, Inoue T, Inatani M, Takihara Y, Ogata-Iwao M, Tanihara H
  • 雑誌名: Japanese Journal of Ophthalmology 巻: 57 ページ: 514-519
  • DOI: 10.1007/s10384-013-0257-5.
  • 査読あり
• [学会発表] Investigation of Multiple Proinflammatory Cytokines in the Aqueous Humor in Eyes with Secondary Glaucoma (2013)
  • 著者名/発表者名: Inoue T, Tanihara H
  • 学会等名: World Glaucoma Congress 2013
  • 発表場所: Vancouver, Canada
  • 年月日: 20130717-20130720
• [学会発表] Short-term prospective investigation of filtering bleb by three dimensional anterior-segment optical coherence tomography (2013)
  • 著者名/発表者名: Kojima S, Inoue T, Nakashima K, Fukushima A, Tanihara H
  • 学会等名: World Glaucoma Congress 2013
  • 発表場所: Vancouver, Canada
  • 年月日: 20130717-20130720
• [学会発表] Visualization of actin filament using time-lapse fluorescent microscopy in trabecular meshwork cells (2013)
  • 著者名/発表者名: Fujimoto T, Inoue T, Inoue-Mochita M, Kasaoka N, Shobayashi K, Tanihara H
  • 学会等名: World Glaucoma Congress 2013
  • 発表場所: Vancouver, Canada
  • 年月日: 20130717-20130720
• [学会発表] Investigation of Multiple Proinflammatory Cytokines in the Aqueous Humor in Eyes with Secondary Glaucoma (2013)
  • 著者名/発表者名: Inoue T, Tanihara H
  • 学会等名: The Annual Meeting of the Association for Research in Vision and Ophthalmology
  • 発表場所: Seattle, Washington, USA
  • 年月日: 20130505-20130509
• [学会発表] Short-term prospective investigation of filtering bleb by three dimensional anterior-segment optical coherence tomography (2013)
  • 著者名/発表者名: Kojima S, Inoue T, Nakashima K, Fukushima A, Tanihara H
  • 学会等名: The Annual Meeting of the Association for Research in Vision and Ophthalmology
  • 発表場所: Seattle, Washington, USA
  • 年月日: 20130505-20130509
• [学会発表] Identification of TGF-β2-induced proinflammatory cytokines secreted from cultured trabecular meshwork cells (2013)
  • 著者名/発表者名: Inoue-Mochita M, Inoue T, Fujimoto T, Awai-Kasaoka N, Tanihara H
  • 学会等名: The Annual Meeting of the Association for Research in Vision and Ophthalmology
  • 発表場所: Seattle, Washington, USA
  • 年月日: 20130505-20130509
• [学会発表] Evaluation of filtering blebs with transconjunctival oozing by anterior segment optical coherence tomography (2013)
  • 著者名/発表者名: Nakashima K, Inoue T, Fukushima A, Hirakawa S, Kawaji T, Tanihara H
  • 学会等名: The Annual Meeting of the Association for Research in Vision and Ophthalmology
  • 発表場所: Seattle, Washington, USA
  • 年月日: 20130505-20130509
• [備考] 熊本大学大学院生命科学研究部眼科学分野 研究業績
  • URL: http://www2.kuh.kumamoto-u.ac.jp/ganka/kyousitu/gyouseki.html