歯肉上皮組織におけるＲＡＮＫＬの発現・機能解明

2012 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 23792487
• 研究機関: 九州歯科大学
• 研究代表者: 臼井 通彦 九州歯科大学, 歯学部, 助教 (10453630)
• キーワード: RANKL / 歯肉上皮

研究概要

歯周病に罹患している患者の歯肉溝滲出液中には、マクロファージなど免疫細胞が産生する炎症性サイトカインなどが検出されることが知られている。その歯肉溝滲出液中にもRANKLが含まれていることが報告されている.しかし、歯肉溝を形成する細胞である歯肉上皮細胞におけるRANKLの発現・機能に関しては未だ不明である。歯肉上皮細胞株であるCa9-22細胞からRNA、タンパクを抽出しRT-PCR法にてRANKL mRNA、western blotting法にてタンパク発現の有無を調べた結果、RANKLの発現を確認することができた。次にマウスの歯周組織に免疫染色を行い、RANKLタンパクの発現を検証した。付着上皮、歯肉溝内上皮、口腔歯肉上皮にその発現をみることができた。。次に、歯肉上皮細胞をTNF-αで刺激し、RANKL 発現に対する影響を検討した結果、RANKL発現はTNF-α刺激により有意に増加した。最後にTNF-がRANKL発現を誘導する経路を調べるために、PKA経路の阻害および活性化を行った。その結果、Ca9-22においてPKA阻害剤（H89、PKI）で処理されたTNF-αはRANKL mRNAおよびRANKLタンパクの発現を有意に減少させ、PKA活性化因子（Forskolin）で処理されたTNF-αはRANKL mRNAおよびRANKLタンパクの発現を有意に増加させた。次に、歯肉上皮細胞の発現するRANKLが実際に機能するか否かを検証するために、破骨細胞前駆細胞と歯肉上皮細胞を共存培養した。その結果、わずかではあるが破骨細胞が形成され、TNF-α, Forskolin処理により、形成される破骨細胞数は増加した。歯肉上皮細胞はTNF-α-PKAシグナルを介したRANKL産生により破骨細胞形成を支持することが示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] A. actinomycetemcomitans LPS Enhances Foam Cell Formation Induced by LDL. (2013)
  • 著者名/発表者名: Morishita A, Ariyoshi W, Okinaga T, Usui M, Nakashima K, Nishihara T
  • 雑誌名: Journal of Dental Research 巻: in press ページ: in press
  • 査読あり
• [雑誌論文] The distribution of S100A8 and S100A9 in gingival epithelium of mice (2013)
  • 著者名/発表者名: Nishii K, Usui M, Yamamoto G, Yajima S, Tsukamoto Y, Tanaka J, Tachikawa T, Yamamoto M.
  • 雑誌名: Journal of Periodontal Research. 巻: in press ページ: in press
  • 査読あり
• [雑誌論文] Role of junctional epithelium in periodontal innate defense and homeostasis. (2012)
  • 著者名/発表者名: Tsukamoto Y, Usui M, Yamamoto G, Takagi Y, Tachikawa T, Yamamoto M, Nakamura M.
  • 雑誌名: Journal of Peridontal Research 巻: 47 ページ: 750-757
  • 査読あり
• [学会発表] Gingival epithelial cells regulate osteoclast formation by producing RANKL.
  • 著者名/発表者名: Usui M, Fujihara R, Nishii K, Yamamoto M, Nakashima K.
  • 学会等名: The 98th annual meeting of American Academy of Periodontology in collaboration with the Japanese Society of Periodontology
  • 発表場所: Los Angeles, USA
• [学会発表] TNF-αは歯肉上皮細胞においてTNFI型受容体-PKAシグナリングを介してRANKL発現を誘導する
  • 著者名/発表者名: 藤原亮一、臼井通彦、西井浩介、塚本康巳、山本松男
  • 学会等名: 第136回日本歯科保存学会
  • 発表場所: 沖縄
• [学会発表] TNF-α induces RANKL Expression in Gingival Epithelial Cells through PKA Signaling.
  • 著者名/発表者名: 藤原亮一、 臼井通彦、 西井浩介、 塚本康巳、 山本松男
  • 学会等名: 第32回昭和歯学会総会
  • 発表場所: 東京
• [図書] The New Frontiers in Research for Oral Cancer. (2013)
  • 著者名/発表者名: Usui M
  • 総ページ数: 51-64
  • 出版者: Maruzen