| 研究概要 |
網膜は中枢神経組織の中でも細胞系譜がほぼ解明され、解析ツールが整ったモデル器官といえる。網膜では内在性神経前駆細胞としてMullerグリア細胞の機能が注目されつつあるが、本研究ではglial fibrillary acidic protein(GFAP)の発現に着目し、GFAP陽性および陰性Haller細胞の神経前駆細胞としてのpotentialを解析する。またGFAP陽性Muller細胞を発生過程の網膜および変性網膜において可視化して追跡することにより、in vivoにおける脱分化過程を検討するとともに,Mnller細胞特異的な遺伝子欠損マウスを活用し、Muller細胞がもつ神経保護・再生能の全体像を解明することを目的とする。本年度は以下の事項を中心に研究を進めた。GFAP-cre/ROSA mouseにおけるMuller細胞の発生を、X-gal染色とGLASTを含む種々のMuller細胞マーカーを用いた免疫組織化学的手法によって経時的に調べ、各々のマーカーのGFAP陽性・陰性細胞における陽性率を比較した。BrdU陽性細胞中のβgal陽性細胞比率を定量化し、GFAP陽性Muller細胞のin vivoにおける再生能を検討した。GFAP-cre/ROSA mouse由来の培養Muller細胞に対し成長因子、グルタミン酸、レチノイン酸、Wntなどを添加して、神経細胞への分化誘導を試みることにより、Muller細胞のサブタイプ毎に神経前駆細胞としての効率を検討中である。今後はNR1またはTrkBがMuller細胞から欠損したCKOマウスや低親和性神経栄養因子受容体p75NTRノックアウトマウスからMuller細胞を単離し、それぞれの分化・再生能を野生型マウスのMuller細胞と比較することにより、Maller細胞の細胞運命決定における外因性因子の重要度を明らかにしていく。
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