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2023 年度 実施状況報告書

背景組織のプロテアーゼに着目したアミロイド 沈着機序の解明

研究課題

研究課題/領域番号 23K06434
研究機関日本医科大学

研究代表者

堂本 裕加子 (新谷裕加子)  日本医科大学, 医学部, 准教授 (30596961)

研究期間 (年度) 2023-04-01 – 2026-03-31
キーワードアミロイドーシス / プロテオミクス / メタロミクス
研究実績の概要

本研究では、ProteomicsやMetallomicsによる多角的な検討によりアミロイド沈着機序の解明を目指しており、ヒトのホルマリン固定パラフィン包埋(FFPE)検体を用い、全身臓器の沈着パターンや背景組織における内因性プロテアーゼに注目し研究を進めている。

まず、アミロイド周囲環境に関する検討として剖検症例の心筋組織を用いて、アミロイド沈着による背景組織への影響をみるためにRNA-Sequencing(RNA-Seq)とプロテオーム解析を行った。トランスサイレチンアミロイドーシス(ATTR)2例、軽鎖κ型アミロイドーシス(ALκ)2例のRNA-Seqを行った。この4例に、ATTR、ALκ、軽鎖λ型アミロイドーシス(ALλ)各1例ずつを加えて7例のプロテオーム解析を行った。
RNA-Seqの結果から、アミロイド沈着の多い領域では、細胞膜や細胞内の細胞膜関連蛋白質が低下、アミロイド関連蛋白質が増加していた。これに加えて、いくつかの細胞小器官に関連する蛋白質がアミロイド沈着に伴って増加していることが明らかとなった。プロテオーム解析結果は解析に十分な蛋白質数が検出できなかった。
次に、誘導結合プラズマ質量分析法(ICP-MS)を用いた元素分析から、心筋組織で虚血に伴って生じた線維化部分で、カルシウム、リン、アルミニウムなどの検出が低下しており、線維化と傷害を受けた心筋との境界部でアルミニウムの検出が増加していることが分かった。
アミロイド線維抽出法に関しては、市販キットを工夫して使用することにより、アミロイド線維の抽出とWestern blottingの条件検討が整いつつある。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

当施設の技師に加えて、共同研究施設や大学院生の協力により、解析や条件検討がスムーズに行えたため、概ね順調に研究を行うことができている。

今後の研究の推進方策

RNA-Seqに関しては、心臓での解析結果から注目すべき蛋白質に対し免疫染色などを用いて検討していく予定である。また、心臓以外の臓器で、限局性アミロイドーシスも含めた様々な臓器、アミロイド病型でRNA-Seqを行う、また、空間的トランスクリプトーム解析法も試みたいと考えている。
プロテオーム解析結果では、RNA-Seqの結果から注目した蛋白質が検出できておらず、双方のデータを組み合わせた解析は行えていない。今後、さらに高性能な装置でのプロテオーム解析を試みつつ、データの解析方法も検討する予定である。
誘導結合プラズマ質量分析法(ICP-MS)を用いた元素分析についても、今後、臓器の種類やアミロイドの種類を増やして、検討を進める予定である。
アミロイド線維抽出法に関しては、Western blottingは可能となったが、もう少し条件検討を進め、抽出できたアミロイド線維を用いて、免疫沈降法をもちいてアミロイド線維を断片化することなく回収し、マトリックス支援レーザー脱離イオン化(MALDI)質量分析法での解析を試みたい。

次年度使用額が生じた理由

共同研究施設の協力で消耗品を節約できたため、残金を次年度予算とすることができた。

  • 研究成果

    (19件)

すべて 2024 2023

すべて 雑誌論文 (9件) (うち査読あり 8件、 オープンアクセス 2件) 学会発表 (10件)

  • [雑誌論文] Immunohistochemical typing diagnosis of amyloidosis: Utility and limitations as determined by liquid chromatography-tandem mass spectrometry.2024

    • 著者名/発表者名
      Shintani-Domoto Y, Ishino K, Fujii T, Kitamura T, Teduka K, Naiki H, Sakatani T, Ohashi R.
    • 雑誌名

      J Nippon Med Sch.

      巻: 91 ページ: -

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Identification of uromodulin deposition in the stroma of perinephric fibromyxoid nephrogenic adenoma by mass spectrometry.2024

    • 著者名/発表者名
      Yoshimura K, Ito Y, Suzuki M, Horie M, Nishiuchi T, Shintani-Domoto Y, Shigehara K, Oshima H, Oshima M, Goto A, Nojima T, Tsuzuki T, Mizokami A, Ikeda H, Maeda D.
    • 雑誌名

      Pathol Int.

      巻: 74 ページ: 187-196

    • DOI

      10.1111/pin.13409.

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Carcinoma showing thymus-like elements (CASTLE) with amyloid deposition in the parotid gland.2024

    • 著者名/発表者名
      Hamada M, Miyama Y, Matsumura S, Shintani-Domoto Y, Urano M, Yasuda M.
    • 雑誌名

      Pathol Int.

      巻: 74 ページ: 227-233

    • DOI

      10.1111/pin.13420.

    • 査読あり
  • [雑誌論文] A case of nodular cutaneous amyloidosis presenting as refractory leg skin ulcers.2024

    • 著者名/発表者名
      Yoshioka A, Shintani-Domoto Y, Ishino K, Kubo A, Kunisada M. A case of nodular cutaneous amyloidosis presenting as refractory leg skin ulcers.
    • 雑誌名

      J Dermatol.

      巻: - ページ: 1346-8138

    • DOI

      10.1111/1346-8138.17117.

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Dipeptidyl peptidase-4 inhibitor-related renal disease. J Diabetes Complications.2023

    • 著者名/発表者名
      Suenaga A, Sawa N, Oba Y, Ikuma D, Sekine A, Hasegawa E, Mizuno H, Suwabe T, Ikeda S, Tsujimoto T, Kono K, Shintani-Domoto Y, Kinowaki K, Ohashi K, Miyazono M, Yamaguchi Y, Ubara Y.
    • 雑誌名

      J Diabetes Complications.

      巻: 10 ページ: -

    • DOI

      10.1016/j.jdiacomp.2023.108590

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Steep increase in the number of transthyretin-positive cardiac biopsy cases in Japan: evidence obtained by the nation-wide pathology consultation for the typing diagnosis of amyloidosis.2023

    • 著者名/発表者名
      Naiki H, Yamaguchi A, Sekijima Y, Ueda M, Ohashi K, Hatakeyama K, Ikeda Y, Hoshii Y, Shintani-Domoto Y, Miyagawa-Hayashino A, Tsujikawa H, Endo J, Arai T, Ando Y
    • 雑誌名

      Amyloid

      巻: 30 ページ: 321-326

    • DOI

      10.1080/13506129.2023.2180334.

    • 査読あり
  • [雑誌論文] The Myocardial Accumulation of Aggregated Desmin Protein in a Case of Desminopathy with a de novo DES p.R406W Mutation2023

    • 著者名/発表者名
      Takegami N, Mitsutake A, Mano T, Shintani-Domoto Y, Unuma A, Yamaguchi-Takegami N, Ishiura H, Sakuishi K, Ando M, Yamauchi H, Ono M, Morishita S, Mitsui J, Shimizu J, Tsuji S, Toda T.
    • 雑誌名

      Intern Med.

      巻: 62 ページ: 2883-2887

    • DOI

      10.2169/internalmedicine.0992-22

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Elucidation of the mechanism of amyloid A and transthyretin formation using mass spectrometry-based absolute quantification.2023

    • 著者名/発表者名
      Shintani-Domoto Y, Ode L. K, Nomura S, Abe H, Ueda R. H, Sakatani T, Ohashi R.
    • 雑誌名

      Virchows Archiv

      巻: - ページ: -

    • DOI

      10.1007/s00428-023-03591-w

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] アミロイドーシスと質量分析イメージング2023

    • 著者名/発表者名
      堂本裕加子, 内木宏延
    • 雑誌名

      医学のあゆみ

      巻: 287 ページ: -

  • [学会発表] 皮膚アミロイドーシスと周囲環境に対する検討2024

    • 著者名/発表者名
      堀井千裕、宮崎海、堂本裕加子、山田麻以、岩田隆、石野孔祐、藤井雄文、北村妙子、坂谷貴司、大橋隆治
    • 学会等名
      第113回日本病理学会総会
  • [学会発表] 質量分析法を用いた左室の心筋におけるタンパク質の発現量と年齢との相関について2024

    • 著者名/発表者名
      長谷川湧生、宮田隆宏、宮崎海、堂本裕加子、藤井雄文、北村妙子、工藤光洋、石野孔祐、坂谷貴司、大橋隆治
    • 学会等名
      第113回日本病理学会総会
  • [学会発表] 胎児発育不全を伴う早産胎盤におけるマクロファージ分極の変化2024

    • 著者名/発表者名
      滝澤彩子、石野孔祐、藤井雄文、許田典男、工藤光洋、堂本裕加子、坂谷貴司、松島隆、鈴木俊治、大橋隆治
    • 学会等名
      第113回日本病理学会総会
  • [学会発表] アミロイドサイエンスにおけるプロテオーム解析の可能性2023

    • 著者名/発表者名
      堂本裕加子
    • 学会等名
      第10回日本アミロイドーシス学会学術集会
  • [学会発表] アミロイドサイエンスにおけるプロテオーム解析の可能性2023

    • 著者名/発表者名
      堂本裕加子
    • 学会等名
      第112回日本病理学会総会
  • [学会発表] 質量分析法を用いた左室の心筋におけるタンパク質発現量と年齢との相関2023

    • 著者名/発表者名
      宮崎海、堂本裕加子、長谷川湧生、宮田隆宏、藤井雄文、北村妙子、石野孔祐、工藤光洋、坂谷貴司、大橋隆治
    • 学会等名
      第45回心筋生検研究会
  • [学会発表] 質量解析より診断に至ったAApoA-Ⅳ心アミロイドーシスの一例2023

    • 著者名/発表者名
      増谷優、尾上健児、中野知哉、坂口泰弘、遠藤仁、堂本裕加子、川田啓之、添田恒有
    • 学会等名
      第45回心筋生検研究会
  • [学会発表] 質量分析による定量法を用いたアミロイド線維形成メカニズムの推測2023

    • 著者名/発表者名
      堂本裕加子、大出晃士、坂谷貴司、大橋隆治
    • 学会等名
      第10回日本アミロイドーシス学会学術集会
  • [学会発表] 再発を繰り返した皮膚ALアミロイドーシスの一例2023

    • 著者名/発表者名
      堀井千裕、宮崎海、堂本裕加子、藤井雄文、石野孔祐、北村妙子、坂谷貴司、大橋隆治
    • 学会等名
      第10回日本アミロイドーシス学会学術集会
  • [学会発表] 質量分析法を用いた左室の心筋におけるタンパク質2023

    • 著者名/発表者名
      長谷川湧生、宮田隆宏、堂本裕加子、藤井雄文、石野孔祐、工藤光洋、坂谷貴、大橋隆治
    • 学会等名
      第112回日本病理学会総会

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公開日: 2024-12-25  

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