| 研究課題/領域番号 |
23K07225
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
窪田 拓生 大阪大学, 大学院医学系研究科, 准教授 (40629135)
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| 研究期間 (年度) |
2023-04-01 – 2026-03-31
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| キーワード | 小児内分泌学 / 骨代謝学 |
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| 研究実績の概要 |
重症骨形成不全症（OI）は有効な治療法がなく、新規治療法の開発が求められている。骨細胞は骨形成・骨量・骨代謝を統括する司令塔の役割を果たしている。本研究では疾患骨細胞における特異的な機能障害を解明し、新規治療の進展に有用である知見を得ることを目的とする。OI患者由来iPS細胞、遺伝子修復iPS細胞を使用し骨細胞分化誘導を行い比較評価することで、疾患特異的骨細胞機能解析を行った。
重症OI由来である、それぞれグリシン置換、エクソンスキッピングのバリアントを有する2つのiPS細胞を使用した。それぞれのOI-iPS細胞について、CRISPR-Cas9システムを使用したゲノム編集でisogenic controlの細胞を作成した。骨細胞分化誘導(二次元培養)を行い、Alizarin Red染色にて石灰化を確認、RT-PCRによりmRNA発現の評価を行い骨細胞マーカーのDay 10までの経時的な上昇を確認した。OI-iPSとisogenic control-iPSの2群で骨細胞分化誘導を行い、Alizarin Red染色により石灰化を比較した。Day 7での石灰化の評価、カルシウム定量では有意差が認められなかった。Day 10でのmRNAにおいて、骨細胞マーカーであるSOSTの発現に有意差は認められなかった。次に、コラーゲンゲルを使用し、三次元培養として骨細胞分化誘導を行い、mRNAの発現をRT-PCRで評価した。Day 21におけるFGF23やDKK1といった骨細胞と関連するmRNAの発現は二次元培養におけるDay 10での発現量より多く、三次元培養の有用性が考えられた。OIとisogenic controlで骨細胞分化誘導後の有意差を探索していく予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
二次元培養の骨細胞分化誘導において、OI-iPSとisogenic control-iPSの2群間で、石灰化能、骨細胞マーカー発現に差は認めなかった。二次元培養が骨細胞分化誘導において最適ではない可能性がある。
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| 今後の研究の推進方策 |
コラーゲンゲルを用いた三次元培養の方が二次元培養より、より生体に近い状態を反映する可能性があるため、三次元培養の骨細胞分化誘導を行い、OI-iPSとisogenic control-iPSの2群間での石灰化能、骨細胞マーカー発現を検討していく予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
実験方法を検討し直し、三次元培養を開始するまでに時間がかかったため。
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