強毒型MRSAによる感染症の迅速診断法の開発

2023 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 23K07928
• 研究機関: 東京薬科大学
• 研究代表者: 中南 秀将 東京薬科大学, 薬学部, 教授 (20548515)
• 研究期間 (年度): 2023-04-01 – 2026-03-31
• キーワード: メチシリン耐性黄色ブドウ球菌 / ΨUSA300 clone / バイオマーカー / 迅速診断法

研究実績の概要

USA300 cloneに特異的な単一の遺伝子や塩基配列を解明するため、USA300 cloneを含む100株のPanton-Valentine leukocidin（PVL）陽性メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（MRSA）の全ゲノム配列を次世代シーケンサー（NGS）で解析した。得られたデータは英文（1報）、国内学会発表（5件）、招待講演（1件）にて発表した。
・英文：1. Kaneko, H., et al., Nakaminami, H. Significant increase in the prevalence of Panton-Valentine leukocidin-positive methicillin-resistant Staphylococcus aureus, particularly the USA300 variant ΨUSA300, in the Japanese community. Microbiol. Spectr. 11(6): e01248-23 (2023)
・国内学会発表：1. 金子 寛, 他 (口頭). 第35回微生物シンポジウム (岡山)(2023), 2. 吉田 拓真, 他 (口頭). 第67回日本ブドウ球菌研究会 (仙台)(2023), 3. 吉田 拓真, 他 (口頭). 第70回日本化学療法学会東日本支部総会 (東京)(2023), 4. 沼舘 達哉, 他 (ポスター). 日本薬学会第144年会 (横浜)(2024), 5. 金子 寛, 他 (ポスター). 日本薬学会第144年会 (横浜)(2024)(学生優秀発表賞受賞)
・招待講演：1. 中南 秀将. メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（MRSA）のクローンタイプによる薬剤感受性の特徴. 第35回日本臨床微生物学会総会・学術集会 (横浜)(2024)

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

当初200株のゲノム解析を予定していたが、ライブラリ調整に難航し、半分の100株のゲノム解析に留まってしまった。しかし、得られた100株のゲノムデータを活用し、本邦で最も流行しているPVL陽性MRSAの遺伝子型がΨUSA300というcloneであることを明らかにした。また、新たにPVLと毒素性ショック症候群毒素（TSST-1）を産生するST22-PT cloneが増加しつつあることを見出した。
マイクロ流路PCR装置は、学内の生体分析化学教室が設計し、申請者と古くから親交がある株式会社ジャノメに試作機の作製を依頼した。

今後の研究の推進方策

残り100株のPVL陽性MRSAのゲノムデータを取得し、比較ゲノム解析を実施する。見出したバイオマーカーについては、日本DNAデータバンクに登録されている微生物ゲノムライブラリを使用して、ΨUSA300 cloneやST22-PT cloneに特異的であることを確認する。見出したバイオマーカーをリアルタイムPCRで検出するためのプローブとプライマーを作成し、申請者が保有する種々の遺伝子型のMRSA（約10,000株）および様々な菌種で構成される皮膚常在菌（約5,000株）との交差反応性を検証する。
マイクロ流路PCR装置の試作機が完成したら動作確認を行う。実際の皮膚感染症患者の検体に応用する前に、滅菌生理食塩水にウシ血清アルブミンや馬脱繊維血液を添加し、USA300 cloneを含む種々の細菌を混入した疑似検体を作成し、作製したマイクロ流路PCRシステムの実用性を検証する。

研究成果

• [雑誌論文] Significant increase in the prevalence of Panton-Valentine leukocidin-positive methicillin-resistant Staphylococcus aureus, particularly the USA300 variant ΨUSA300, in the Japanese community (2023)
  • 著者名/発表者名: Kaneko, H., Kanai, M., Saito, T., Yanagi, Y., Kobayashi, H., Kurihara, R., Ikeda, M., Nemoto, O., Baba, N., Matsuzaki, Y., Sawamura, D., Shimoe, F., Inaba, Y., Kobayashi, Y., Kawasaki, S., Ueki, T., Funatsu, S., Shirahama, S., Oba, M., Hasegawa, T., Furukawa, H., Miyata, T., Isonokami, M., Fujita, S., Nakaminami, H.
  • 雑誌名: Microbiol. Spectr. 巻: 11 ページ: e01248-23
  • DOI: 10.1128/spectrum.01248-23
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（MRSA）のクローンタイプによる薬剤感受性の特徴 (2024)
  • 著者名/発表者名: 中南 秀将
  • 学会等名: 第35回日本臨床微生物学会総会・学術集会
  • 招待講演
• [学会発表] 院内型MRSA ST764 cloneの特徴と流行状況 (2024)
  • 著者名/発表者名: 沼舘 達哉、吉田 拓真、名取 大雅、大関 壮実、渡辺 里香、中南 秀将
  • 学会等名: 日本薬学会第144年会
• [学会発表] 本邦の皮膚感染症患者から分離された黄色ブドウ球菌におけるmecAの有無と抗菌薬感受性の関連性 (2024)
  • 著者名/発表者名: 金子 寛、平岡 春花、中南 秀将
  • 学会等名: 日本薬学会第144年会
• [学会発表] MRSAの遺伝子型と皮膚・軟部組織感染症の疾患特異性 (2023)
  • 著者名/発表者名: 金子 寛、小林 華、大竹 省吾、柳 侑花、齊藤 拓光、金井 美樹、中南 秀将
  • 学会等名: 第35回微生物シンポジウム
• [学会発表] 病院で分離されたSCCmec IV型MRSAの分子疫学的解析 (2023)
  • 著者名/発表者名: 吉田 拓真、佐原 里佳、増田 英敏、金子 寛、中南 秀将
  • 学会等名: 第67回日本ブドウ球菌研究会
• [学会発表] 病院内で増加するCA-MRSAの分子疫学的特徴 (2023)
  • 著者名/発表者名: 吉田 拓真、山岸 由佳、三鴨 廣繁、中南 秀将
  • 学会等名: 第70回日本化学療法学会東日本支部総会