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2023 年度 実施状況報告書

C5-C5aR1/2 axisを標的とした膵癌進展機構の解明と新規補体免疫賦活化療法への応用

研究課題

研究課題/領域番号 23K08207
研究機関千葉大学

研究代表者

江藤 亮大郎  千葉大学, 医学部附属病院, 医員 (40971718)

研究分担者 高野 重紹  千葉大学, 大学院医学研究院, 講師 (20436380)
三島 敬  千葉大学, 医学部附属病院, 助教 (70802560)
大塚 将之  千葉大学, 大学院医学研究院, 教授 (90334185)
鈴木 大亮  千葉大学, 大学院医学研究院, 助教 (90422229)
研究期間 (年度) 2023-04-01 – 2026-03-31
キーワード膵癌 / 腫瘍免疫 / 補体 / C5a
研究実績の概要

当院で2014年1月から2018年12月に手術した膵癌130例 (術前化学療法なし)の検体を用いて、C5a、C5aR1、C5aR2の免疫染色を行った。腫瘍細胞の細胞質における発現の有無でC5a-C5aR1 axis group (42例)とC5a-C5aR2 axis group (67例)を抽出した。C5a-C5aR2 axis groupでOS・DFSが有意に延長した(p=0.03, 0.02)。また、C5a-C5aR1+/C5a-C5aR2- group (12例)とそれ以外のgroup (118例)と比較し、OS・DFSが有意に短縮した(p=0.0045, 0.0037)。次に、腫瘍免疫の評価としてCD8、FOXP3、CD11bの免疫染色を行い、CD8+ Tリンパ球、FOXP3+ Treg、CD11b+ MDSCをそれぞれ定量化した。C5a-C5aR1+/C5a-C5aR2- groupでは、抗腫瘍効果を示すCD8+ Tリンパ球は有意に減少し (p<0.001)、CD8+ Tリンパ球の動員を抑制するFOXP3+ Treg、CD11b+ MDSCは有意に増加していた (p<0.001)。CD8+ Tリンパ球の定量化を高発現・低発現の2群に分けると、高発現群 (cut off line 29)でOS、DFSが有意に延長した(p=0.013, 0.016)。C5a-C5aR1+/C5a-C5aR2- group では、病理組織学的に計測したTumor volume (mm3)は有意に増大していた。
C5a-C5aR1 axisは腫瘍促進的、C5a-C5aR2 axisは腫瘍抑制的に作用している可能性が臨床検体を用いた検討で考慮された。また、その要因として、腫瘍容積の増大と腫瘍免疫が関与しており、C5aR1を標的とした治療のアプローチの可能性が示唆された。
また、選択的C5aR1阻害剤であるCCX168を用いたin-vitroの検討を開始した。ヒト細胞株であるMIA PaCa-2, BxPC3を用いて、CCX168投与群と非投与群でproliferation assayを行った。いずれもCCX168投与群で腫瘍増殖が有意に抑制された。また、C5aR1 siRNAを導入し、C5aR1のknockdownをwestern blottingで確認し、poriliferation assayを行い、C5aR1 knockdown群で腫瘍増殖が有意に抑制された。
今後の治療標的としたC5aR1を主軸とした検討が期待できる結果となった。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

臨床検体を用いた免疫染色を実施し、臨床的予後および腫瘍免疫との関連、予後予測因子の抽出を実施することができた。さらなる検討としてin-vitroに発展させることができており、選択的C5aR1阻害剤であるCCX168を用いた検討を行っており、proliferation assayで腫瘍の増殖が抑制されることが確認できている。上記結果から、最近ではin-vivoでのCCX168を用いたpreclinical medicineの導入を予定できる段階にまで至っている。

今後の研究の推進方策

マウス膵癌細胞株であるKPCYを用いた実験検討を開始した。KPCYに対してレンチウイルスを介したC5aR1 shRNAの導入を行い、C5aR1のknockdownを作成した。C5aR1 knockdown状態の細胞株とコントロール群でproliferation assayやwestern blottingを用いたsignal pathwayの評価を予定している。また、C5aR1 knockdown状態の細胞株とコントロールの細胞株をマウス(8週 雌)に対して膵被膜下に注入し、第3週目にサクリファイスし、腫瘍容積、ki-67、周囲の免疫細胞の評価を予定している。また、マウスにKPCYを膵被膜下に注入した後からC5aR1の選択的阻害剤(CCX168)の投与群、抗癌剤のGemcitabineとの併用群、コントロール群での腫瘍の容積ki-67、周囲の免疫細胞の評価を予定している。

次年度使用額が生じた理由

本研究においては、免疫染色やwestern blot 等に用いる抗体をはじめとした必要な試薬、さらに膵癌細胞株を用いたin vitro の実験に必要な細胞培養費用が不可欠である。
他、補体受容体の発現制御にまつわる試薬・抗体を用いた検討の費用を算出した。さらに、mouse を用いた動物実験を行う際の実験マウス費用(マウス購入費)、マウス維持費(エサ代を含む)、麻酔薬品等の費用も算出した。これらは今年度に行った費用をもとに算出された費用である。いずれも本研究において十分に必要性および重要性のある試薬、装置および経費であると思われる。

  • 研究成果

    (4件)

すべて 2023

すべて 雑誌論文 (1件) (うち査読あり 1件) 学会発表 (3件)

  • [雑誌論文] C5-C5aR1/2 axis を標的とした膵がん進展機構の解明と新規補体免疫賦活化療法への応用2023

    • 著者名/発表者名
      江藤亮大郎
    • 雑誌名

      BIO Clinica

      巻: 38 ページ: 75-77

    • 査読あり
  • [学会発表] 膵癌でのC5a-C5aR1/2 axis活性が癌周囲免疫環境および予後へ与える影響2023

    • 著者名/発表者名
      江藤亮大郎
    • 学会等名
      第54回日本膵臓学会大会
  • [学会発表] The influence of C5a-C5aR1/2 axis function on the tumor microenvironment and clinical prognosis in pancreatic cancer2023

    • 著者名/発表者名
      江藤亮大郎
    • 学会等名
      第82回日本癌学会学術総会
  • [学会発表] 膵癌におけるC5a-C5aR1/2 axisの癌周囲免疫環境のremodelingについて2023

    • 著者名/発表者名
      江藤亮大郎
    • 学会等名
      日本がん転移学会学術集会・総会

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公開日: 2024-12-25  

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