2023 年度実施状況報告書

口腔カンジダ症進行機序の解明ー創薬ターゲットとしての細胞表層タンパクの可能性ー

研究課題

研究課題/領域番号	23K09379
研究機関	東京医科大学
研究代表者	柴山和子東京医科大学, 医学部, 客員研究員 (60408317)
研究分担者	太田一正東京医科大学, 医学部, 准教授 (30307376)
研究期間 (年度)	2023-04-01 – 2026-03-31
キーワード	Candida albicans / カンジダ症 / 口腔カンジダ症
研究実績の概要	Candida albicansの増殖必須栄養素である鉄の獲得にリレーネットワーク様に働く一連のタンパク群は、システインに富む固有のCFEM モチーフを有する。モチーフ自体の役割はいずれのタンパクにおいても解明されていない。各タンパクおよびモチーフの特性を明らかにするため、欠損株および補完株の構築を試みた。 Candidaはゲノムの複雑性と染色体分離の不安定性のため困難を生じており、今年度は従来の選択マーカーを用いる方法での組換え体の構築に至らなかった。モチーフ部分のみの欠損株構築テクニックの確立は、同モチーフを有する一連のタンパク群の機能解析にも応用可能で有益であることから、新たな選択マーカーやPCR技術の利用を試みている。
現在までの達成度 (区分)	現在までの達成度 (区分) 4: 遅れている理由モチーフ部分のみの欠損株構築にあたり、二倍体であるCandida albicansはゲノムの複雑さと染色体分離の不安定性のため組換え体構築に困難が生じており、克服手段として数種の選択マーカーカセットを用いたfusion PCRを試みているが構築には至っていない。
今後の研究の推進方策	ゲノム中の特定の遺伝子を切断できるゲノム編集ツールを取り入れた対処を試み、モチーフ部分のみの欠損株の構築を目指す。このゲノム編集法により切断箇所に新たな配列を挿入することも可能なため、補完株の構築にも使用する。
次年度使用額が生じた理由	欠損株構築が困難であり、新たな方法の検討と決定に時間を要した。当初計画は十分に練られていたが、研究目的達成のため変更は必須であり、この変更は適切で他の方法では代替えできない。欠損株構築のためゲノム編集ツールの使用を検討しており、ノックアウトプラスミドの作成等に予算を執行する予定である。また、学会発表旅費等は使用しなかったため、次年度に使用することとした。