| 研究課題/領域番号 |
23K09394
|
|---|
| 研究機関 | 名古屋市立大学 |
|---|
研究代表者 |
岡部 一登 名古屋市立大学, 医薬学総合研究院(医学), 講師 (50801453)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2023-04-01 – 2026-03-31
|
| キーワード | 放射線性顎骨壊死 / エクソソーム / 骨髄由来間葉系幹細胞 / 酸素環境 |
|---|
| 研究実績の概要 |
放射線治療は頭頸部がんに対して高い治療効果を有するが，口腔粘膜炎や口腔乾燥等の有害事象を必発する.特に晩期に発症する顎骨壊死(ORNJ)は著しくQOLを 低下させるにもかかわらず，未だ治療法は確立していない.研究代表者の最終目的は，難治性疾患であるORNに対して，ヒト骨髄間葉系幹細胞(MSCs)由来エクソソーム（EVs）を用いた治療法を開発することである．培養環境により，MSCsは遺伝子発現や細胞挙動が変化する．特に酸素環境により，EVsの組成が変化することに本研究では着目し，ORNJに対して優れた治療効果を示すEVsを分泌する最適条件を探索する．
MSCsを20％，10％，2％O2の各酸素環境下で培養した後，培養上清から超遠心法によりEVsを回収した．粒径は約100nmであり，ウエスタンブロット法で特異的表面抗原であるCD63，CD81，CD9 を確認した.また透過型電子顕微鏡により形態学的評価を実施した.各環境下で回収したEVsの分泌量を比較した．
現在は，放射線照射したラットMSCsと各環境下で回収したEVsとの共培養による効果に関する評価を開始している．評価項目として，分化能および遊走能，増殖能，血管新生能としている．分化能として， 共培養したラットMSCsを骨芽細胞，脂肪細胞へ分化誘導後にアリザリンレッドS染色，オイルレッドO染色により評価する．遊走能および増殖能は，Gap Closureアッセイ，MTTアッセイで評価する．血管新生能は，各EVsとヒト臍帯血静脈内皮細胞との共培養によるTube formation assayにより評価する．分化能や血管新生能について，骨および血管関連遺伝子であるRunx2，OCN，VEGF-α等の発現量をRT-PCR法でも評価する．
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
進捗状況が遅延していることの最大の理由として，研究代表者の研究環境が変わったことが大きい．また，現在着手している実験内容を実施することに支障はないが，安定した結果が得られておらず，テクニカルエラー等の問題点の確認をしている.
|
| 今後の研究の推進方策 |
現在着手している内容は時間を要し，テクニカルエラーも生じやすい．前所属施設の研究者に相談することは容易であり，現在の所属施設に本研究における手技，内容に精通している研究者が所属しており，協力体制が整っている．定期的なミーティングを開催し，問題点を随時解決し，研究を推進する予定である．
|
| 次年度使用額が生じた理由 |
予定していた動物実験に至っておらず，次年度に使用額が生じた．
|
