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ヒトMRE11/RAS50/NBS1（MRN）は放射線や抗がん剤により引き起こされるDNA二本鎖切断の修復に必須の役割を担うヌクレアーゼ複合体である。DNA二本鎖切断が相同組換えにより修復される際、MRNの働きがどのように制御されているか、またMRNと共に働くとされる複数のヌクレアーゼやDNA結合タンパク質がどのように協調的に働いているかは未だ不明な点が多い。本研究ではMRNの働きを起点に相同組換え開始に働くタンパク質群の働きを、主として生化学・生物物理学的手法を用いて明らかにすることを目的とする。
本年度は過去の研究計画で実施したMRNの動的構造解析で得られた観察結果を元に、MRNの蛋白質構造におけるRAD50のフックモチーフの機能を詳細に解析するため、フックモチーフを種々の二量体形成ドメインと交換した変異型MRNの機能解析を行ない、フックモチーフの役割が基本的にはMRN蛋白質全体の構造を保つことであるという、これまでの知見と合致する結果を得た。また相同組換え反応で働く蛋白質群の精製を進め、相同組換え初期に働くRAD51蛋白質のDNA結合促進に関わるとされるSWSAP1-SWS1蛋白質などのRAD51の働きを調整するメディエーター蛋白質を精製した。SWSAP1-SWS1については特にATPase活性やDNA結合能などの生化学的解析を実施するとともに、RAD51および減数分裂期に働くDMC1との相互作用、1本鎖DNA結合活性促進効果を調べるなどの実験を実施した。
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