| 研究課題/領域番号 |
21H01735
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究機関 | 国立研究開発法人医薬基盤・健康・栄養研究所 |
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研究代表者 |
河原 正浩 国立研究開発法人医薬基盤・健康・栄養研究所, 医薬基盤研究所 ヘルス・メディカル微生物研究センター, プロジェクトリーダー (50345097)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2025-03-31
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| キーワード | キメラ抗原受容体 / 遊走 / シグナル伝達 / 細胞治療 |
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| 研究実績の概要 |
昨年度は、より直接的に遊走活性を評価するために、細胞の形態観察による遊走誘導型キメラ抗原受容体の評価系を構築した。この評価系では、遊走誘導型キメラ抗原受容体を遺伝子導入により安定発現させた浮遊細胞をマルチウェルプレートに播種したため、画像を撮像する際のピントを合わせるために、細胞が沈降するのを30分程度待つ必要があった。本年度は、抗原刺激後の初期の時間帯における細胞遊走応答を画像取得するために、細胞カウント用のチャンバーに少量の体積の細胞懸濁液を注入し、その後すぐに画像を撮像してピントが合った画像を取得することができるかを検証した。実験では、継代維持しているキメラ抗原受容体発現細胞のシグナル伝達活性を一旦初期化するために、抗原を除去した培地にて細胞を一晩培養した。翌朝、抗原を添加した培地を細胞に加えて懸濁し、直後にチャンバーに注入し、インキュベータ内に置いた顕微鏡にセットしてタイムラプス撮影を開始した。得られたタイムラプス画像から細胞形態の時系列的な変化を動画により可視化した。その結果、この画像データ取得法で抗原刺激直後からピントの合った画像を取得でき、実際に抗原添加後すぐに細胞形態が変形して遊走性が上昇していることが示された。そこで、異なるシグナル伝達ドメインを持つ複数のキメラ抗原受容体をそれぞれ発現させた安定細胞株を樹立して同様に画像取得した結果、シグナル伝達ドメインの違いによって遊走性に明確な違いがあることが示された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本年度は、抗原刺激後の初期の時間帯における細胞遊走応答の観察系を構築することが目標であった。実際に、細胞カウント用のチャンバーを利用することで、抗原刺激直後からピントの合った画像を取得でき、抗原添加後すぐに細胞形態が変形して遊走性が上昇していることや、キメラ抗原受容体のシグナル伝達ドメインの違いによる遊走性の差が観測できたことから、おおむね順調に進展している。
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| 今後の研究の推進方策 |
シグナル伝達ドメインを改良したキメラ抗原受容体をデザインし、より高い遊走活性を示すキメラ抗原受容体の開発を引き続き進める。デザインしたキメラ抗原受容体を細胞で安定発現させ、本年度に確立した測定系を利用して遊走活性を評価する。
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