難治性リンパ腫の免疫回避機構の解明と新しい治療法の開発

2021 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 21H02701
• 配分区分: 補助金
• 研究機関: 新潟大学
• 研究代表者: 高田 尚良 新潟大学, 医歯学系, 助教 (90580259)
• 研究分担者: 奥田 修二郎 新潟大学, 医歯学系, 教授 (00512310) ; 近藤 英作 新潟大学, 医歯学系, 教授 (30252951) ; 齋藤 憲 新潟大学, 医歯学系, 准教授 (70426584)
• 研究期間 (年度): 2021-04-01 – 2025-03-31
• キーワード: 悪性リンパ腫 / 腫瘍微小環境

研究実績の概要

最初に研究実施計画で確認済みであったMHC class Iおよびclass IIの発現に関してflow cytometryを用いてMHC class Iおよびclass IIの発現を再度確認し、強発現している細胞株２種類に着目した。この２種類はヒト由来びまん性大細胞型B細胞リンパ腫細胞株であり、一つはEZH2遺伝子に変異があるもの、もう一つは変異のない細胞株である。次にノックアウトに関してはMHC class Iに着目してノックアウト細胞株をCRISPR-Cas9システムを用いてそれぞれ3クローンづつ作成した。ノックアウトに関してはSangerシーケンスおよび免疫組織化学的検索により確認している。その後野生株と併せてこれらのノックアウト細胞株に対してmRNAシーケンスを行い、野生株と比較してノックアウト細胞株で特徴的に上昇・低下しているパスウエイおよびそれに関わる特徴的な変動遺伝子を抽出した。その結果、初期解析では２つの細胞株において共通して変動するパスウエイおよび遺伝子群が抽出でき、その中で腫瘍微小環境の変化に関わる可能性がある遺伝子を見いだすことができた。また、リアルタイムPCR法を用いてこの遺伝子の発現変動を同時に確認した。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

ノックアウト細胞株の作成は当初の予定通りの期間で作成することができ、またmRNAシーケンスも初段階の解析を含めて2021年度内に進めることができた。今後さらに詳細な解析が必要であるが、現段階で興味深い遺伝子が候補として挙がっている。これらの点を総合しておおむね順調に進展していると判断した。

今後の研究の推進方策

今後はまず患者検体を用いてタンパクレベルでのMHCの発現とこの着目している遺伝子の発現がどのように相関しているかを免疫組織化学的検討により行う。また、同時に腫瘍微小環境でのT細胞のexhausted markerについても免疫組織化学的検討を行う。患者検体については現在収集中である。次に着目している遺伝子について共培養系システムを用いて微小環境に影響を及ぼす現象をin vitroで確認する。

研究成果

• [雑誌論文] Single-cell profiling reveals the importance of CXCL13/CXCR5 axis biology in lymphocyte-rich classic Hodgkin lymphoma. (2021)
  • 著者名/発表者名: Aoki T, Chong LC, Takata K, Milne K, Marshall A, Chavez EA, Miyata-Takata T, Ben-Neriah S, Unrau D, Telenius A, Boyle M, Weng AP, Savage KJ, Scott DW, Farinha P, Shah SP, Nelson BH, Steidl C.
  • 雑誌名: Proc Natl Acad Sci USA 巻: 118 ページ: e2105822118
  • DOI: 10.1073/pnas.2105822118.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Characterization of DLBCL with a PMBL gene expression signature. (2021)
  • 著者名/発表者名: Duns G, Vigano E, Ennishi D, Sarkozy C, Hung SS, Chavez E, Takata K, Rushton C, Jiang A, Ben-Neriah S, Woolcock BW, Slack GW, Hsi ED, Craig JW, Hilton LK, Shah SP, Farinha P, Mottok A, Gascoyne RD, Morin RD, Savage KJ, Scott DW, Steidl C.
  • 雑誌名: Blood 巻: 138 ページ: 136-148
  • DOI: 10.1182/blood.2020007683.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Compromised counterselection by FAS creates an aggressive subtype of germinal center lymphoma. (2021)
  • 著者名/発表者名: Razzaghi R, Agarwal S, Kotlov N, Plotnikova O, Nomie K, Huang DW, Wright GW, Smith GA, Li M, Takata K, Yamadi M, Yao C, O'Shea JJ, Phelan JD, Pittaluga S, Scott DW, Muppidi JR.
  • 雑誌名: J Exp Med. 巻: 218 ページ: e20201173
  • DOI: 10.1084/jem.20201173.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Mutational landscape of gray zone lymphoma. (2021)
  • 著者名/発表者名: Sarkozy C, Hung SS, Chavez EA, Duns G, Takata K, Chong LC, Aoki T, Jiang A, Miyata-Takata T, Telenius A, Slack GW, Molina TJ, Ben-Neriah S, Farinha P, Dartigues P, Damotte D, Mottok A, Salles GA, Casasnovas RO, Savage KJ, Laurent C, Scott DW, Traverse-Glehen A, Steidl C.
  • 雑誌名: Blood 巻: 137 ページ: 1765-1776
  • DOI: 10.1182/blood.2020007507.
  • 査読あり
• [学会発表] 胸腺腫および胸腺癌におけるTRA-1-60陽性分画 の病理組織学的検討 (2021)
  • 著者名/発表者名: 高田尚良、齋藤憲、飯岡英和、近藤英作
  • 学会等名: 日本病理学会
• [学会発表] LAG3+ T cell populations in the tumor microenvironment of classical Hodgkin lymphoma and B-cell Non-Hodgkin lymphoma (2021)
  • 著者名/発表者名: Katsuyoshi Takata, Tomohiro Aoki, Lauren C Chong, Katy Milne, Tomoko Miyata-Takata, Karanvir Singh, Talia Goodyear, Pedro Farinha, Graham Slack, Laurie H. Sehn, Kerry J. Savage, Brad H Nelson, David W Scott, Christian Steidl
  • 学会等名: 日本癌学会
• [学会発表] 多発皮膚腫瘍の一例 (2021)
  • 著者名/発表者名: 高田尚良、阿部理一郎、近藤英作
  • 学会等名: 日本病理学会東北支部学術集会
• [学会発表] 中枢神経悪性リンパ腫の病理・病態 (2021)
  • 著者名/発表者名: 高田尚良
  • 学会等名: 新潟リンパ腫研究会
  • 招待講演